桦褐孔菌液体发酵和多糖提取工艺的研究

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桦褐孔菌(Inonotusobliquus)一种大型真菌和珍稀药用菌类。其成分复杂,含有多糖、叶酸衍生物、生物碱、芳香族香草酸等多种活性物质。目前,针对其活性成分已分离出多种物质,有桦褐孔菌素、桦褐孔菌醇、羊毛甾醇、麦角甾醇、多种三萜类化合物、芳香族酸类、叶酸衍生物等。广泛应用于多种疾病的预防及治疗,具有抗肿瘤、抗心血管系统疾病、抗病毒的作用。桦褐孔菌的多糖含量明显高于其它大型真菌类,其中主要是葡聚糖,此外还含有由葡萄糖和少量其它单糖(木糖等)组成的杂多糖。目前已经报道的桦褐孔菌多糖药理作用主要包括抗肿瘤、抗病毒、清除自由基、抑制过氧化、增强免疫力等。本文以桦褐孔菌为试验材料,对桦褐孔菌菌丝体的深层发酵进行研究,并针对具有生理活性的桦褐孔菌多糖进行培养基优化。同时采用减压浓缩技术、醇沉法对桦褐孔菌菌丝体的多糖提取。实验取得以下主要结果:通过析因试验,对桦褐孔菌深层发酵的培养基营养成分进行筛选。对碳源、氮源、无机盐等7个主要因素进行多元线性回归分析后可知,对桦褐孔菌生长影响最大的因素是碳源、氮源、磷酸氢二钾和硫酸镁,因此确定桦褐孔菌液体发酵培养的优化配方为:玉米粉3%、黄豆粉1.5%、磷酸氢二钾0.15%、硫酸镁0.1%。在桦褐孔菌粗多糖的提取试验研究中,其得率和纯度随着温度(0~100℃之间)升高而升高。提取温度高,溶剂的分子动能变大,渗透力、溶解力变高,能够促进多糖溶出,因此桦褐孔菌得率提高,纯度变高。而在提取前期,多糖提取率增长较快是因为溶液中多糖浓度小而桦褐孔菌细胞内多糖的浓度大,较大的浓度差形成推动力,促使粗多糖不断从细胞内溶出。提取时间继续增加至一定程度后,桦褐孔菌粗多糖得率不再增加。这时,溶剂中多糖浓度与菌丝细胞内多糖浓度基本达到平衡,胞内多糖不再向胞外扩散。而同时,长时间的提取使得桦褐孔菌中其他成分可能随之溶出,使得多糖纯度下降。桦褐孔菌细胞内外多糖浓度差所形成的推动力是多糖析出的一个重要因素,胞内外浓度差越大,扩散的多糖就越多。溶剂用量的增加利于增大胞内外多糖浓度差,促进多糖得率的增加。但是,细胞膜对多糖扩散也有阻滞作用,增加溶剂用量虽然能够增大浓度差,促进多糖提取,但对细胞膜结果没有任何影响。通过正交试验可以确定桦褐孔菌的多糖提取的最佳提取工艺为:提取温度80℃、提取时间3.5h、液料比1:15。
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