大肠癌(CRC)是我国常见的恶性肿瘤之一，在消化道肿瘤中的发病率和死亡率均位居第二位。随着我国国民总体生活水平的提高，膳食结构的变化，近年CRC的发病率呈逐年上升趋势，虽CRC诊疗技术有着长足发展，但CRC的总体5年存活率并无显著提高。制约CRC预后的关键因素是如何早期发现、早期诊断与早期治疗CRC病人，预防手术后CRC的复发与转移。因此深入研究CRC的发病机理以及其复发与转移的机制，具有十分重要的临床意义。寻找新的、特异性强、敏感性高的诊断复发与转移的标志物，以及新的分子治疗靶标，是本研究的立题依据和主要目的。 目的建立FasL相互作用蛋白的酵母双杂交系统，为大肠癌肝转移的蛋白质组学研究建立一个相互作用蛋白的实验模型。利用建立的酵母双杂交系统，在人胎肝文库中筛选与FasL相互作用的蛋白质，探讨FasL及其相互作用蛋白在大肠癌发生、发展和在肝转移中的作用机制，为筛选大肠癌肝转移的早期诊断标志物和治疗靶标提供理论依据。 方法构建FasL基因的诱铒蛋白质粒FasL-pGBKT7，应用Western’ Blot验证其能否在酵母AH109细胞中表达FasL蛋白。将FasL-pGBKT7。质粒和人胎肝cDNA文库质粒共转化酵母AH109细胞。通过从低到高严格性地筛选，在人胎肝cDNA文库中筛选并鉴定与FasL相互作用的蛋白；应用生物信息学方法，了解这些蛋白的病理生理功能，分析他们可能在大肠癌肝转移中的作用机制。将FasL相互作用蛋白的基因转染人直肠癌HR一8348细胞，G-418筛选成功转染的细胞；用5-氟脲嘧啶(5-FU)和奧沙利铂作为筛选药物，通过细胞学实验(四唑蓝比色实验，MTT法)，了解转染细胞对5-FU和奥沙利铂的耐药能力，以研究FasL及相互作用蛋白对直肠癌细胞耐药性的影响；用免疫组织化学方法检测FasL及相互作用蛋白在CRC标本中表达情况，比较在CRC不同分期中这些蛋白的表达差异，证实他们在大肠癌肝转移中的作用机制。所有数据均采用SPSS 12.0统计分析软件进行统计分析。第三军医大学硕士学位论文 结果构建的FasL一pGBKT7本身没有自身激活活性，并可以在酵母AHIOg细胞中稳定表达FasL蛋白。通过酵母双杂交系统筛选出10个与FaSL特异性相互作用的蛋白，包括金属硫蛋白1K、lG、2A，组织蛋白酶B，脂肪酸合成酶，干扰素a诱导蛋白27，磷脂清除酶，丝氨酸/苏氨酸样激酶，锚着粘附蛋白以及纤维微丝蛋白一5等。在细胞耐药性实验中，证实了FasL与金属硫蛋白和组织蛋白酶之间的相互作用能够增强人直肠癌HR一8348细胞的耐药能力。通过免疫组织化学检测FaSL、组织蛋白酶、金属硫蛋白在大肠癌中的表达情况，结果表明，癌变的CRC组织中上述蛋白表达明显增高，高于正常大肠粘膜(尸<0 .05)，但在不同分期的CRC组织中表达没有差异(尸>0，05);上述蛋白在CRC组织中的联合表达率比正常大肠粘膜明显增高(尸<0.05)，CRC不同组之间的联合表达情况没有差异(尸>0 .05)。 结论成功建立了筛选FaSL相互作用蛋白的酵母双杂交系统，并初步证明FaSL与组织蛋白酶、金属硫蛋白、锚着粘附蛋白等之间的相互作用与大肠癌的侵袭力、肝转移能力以及大肠癌细胞的耐药性方面密切相关;FaSL与脂肪酸合成酶、磷脂清除酶等之间的相互作用与大肠癌细胞的生长与增殖密切相关。FaSL可能与PKC细胞信号传导途径具有密切关系，通过此系统调节其他蛋白在细胞内的表达，并发生相互作用。FaSL、组织蛋白酶、金属硫蛋白可能为大肠癌诊断的标志物。FaSL在大肠癌发生、发展及肝转移过程中具有中心地位的作用，决定了大肠癌细胞的各种恶性生物学行为，因此FaSL有可能成为治疗大肠癌肝转移的分子标靶。