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本试验利用RAPD技术对四川农业大学脱毒中心种植的29个葡萄品种之间的亲缘关系进行了遗传多样性分析,结果表明: 1.本研究使用了一种改良CTAB法完全适用于葡萄属基因组DNA的提取,得到的DNA量大,产率达到202—366ng/mg(鲜叶)质量高,OD(260/OD280的比值在1.73—1.86之间,不必去除RNA就能用于RAPD的分析,符合RAPD的要求。 2.优化了RAPD反应体系。所得最优反应体系为:反应体积25μl,其中模板DNA稀释5倍,引物浓度1.5gmol/L,Taq DNA聚合酶1.25U,dNTP 0.25mmol/L,MgCl21.5mmol/L,Buffer 25mmol/L,加去离子水补充总体积至25μl。反应程序为94℃预变性2min,94℃变性1min,35℃复性1min,72℃延伸2min,40个循环后,在72℃保持8分钟。 3.从40个随机引物中筛选出8个多态性好的随机引物,用这8个引物对29个葡萄品种进行扩增,8个引物共扩增出了126条DNA带,平均每个引物15.75条,其中111条具有多态性,占总条带数的88.1%,每个引物可扩增出3-34条多态性带,平均每个引物13.9条多态性带。 4.利用计算机软件NTSYSpc(2.10版)统计RAPD数据,用Genetic Distance计算材料间遗传距离。‘京玉’与‘红宝石无核’的遗传距离最小,只有0.1093,相似系数达到90%;‘优无核’与‘早红提’的遗传距离最大为0.8462,相似系数为15%。按照UPGMA法进行聚类分析,将供试的29个葡萄品种分成了五类,第一类有‘峰后’、‘黑蜜’、‘农科3号’、‘无核早红’、‘8612’、‘高妻’和‘红富士’;第二类有‘超藤’、‘美人指’、‘优选皮奥奈’、‘黄金指’、‘京玉’、‘红宝石无核’、‘蜜汁’、‘弗蕾无核’、‘克瑞森无核’、‘皇家秋天’、‘超级无核’、‘维纳斯Ⅱ’、‘青提’、‘维多利亚’、‘红高’、‘京秀’、‘农科2号’、‘维纳斯Ⅰ’;第三类是‘农科1号’;第四类是‘优无核’、‘莫丽莎无核’;第五类为‘早红提’。