酶法制备可口革囊星虫ACE抑制肽

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目的(1)测定可口革囊星虫的水分、灰分、蛋白、氨基酸以及糖原含量。(2)利用可口革囊星虫制备具有ACE抑制活性的酶解产物。(3)从可口革囊星虫蛋白的酶解物中分离出活性较高的ACE抑制肽。方法(1)采用直接干燥法测定水份含量、高温烧法测定灰分含量、氨基酸分析仪测定氨基酸组成和蛋白含量,用苯酚-硫酸法测定糖原含量。(2)利用碱性蛋白酶,中性蛋白酶,木瓜蛋白酶,菠萝蛋白酶,胰蛋白酶,动物蛋白水解酶六种常用蛋白酶对可口革囊星虫蛋白进行酶解,然后用体外试验法检测其酶解产物的ACE抑制率,并筛选出一种最佳蛋白酶,作为制备可口革囊星虫ACE抑制产物的酶,并对其酶解条件进行优化。(3)采用Sephadex G-25凝胶过滤对可口革囊星虫酶解物进行分离,测定各组分的ACE抑制活性,并对ACE抑制活性较强的组分进行稳定性试验及抗消化实验。结果(1)可口革囊星虫的含水量为88.64%,干样中灰分含量为14.58%,蛋白含量为69.5%,氨基酸总量为56.04%,糖原含量为26.12%。(2)六种蛋白酶对可口革囊星虫进行了酶解,并根据酶解后对ACE抑制活性的强弱,筛选出制备ACE抑制肽的最佳水解酶是碱性蛋白酶。通过酶解条件优化,确定出碱性蛋白酶酶解的最适反应条件为:酶解温度60℃,反应时间4小时,最佳pH为9.0,底物浓度为5%,酶用量为2%。(3)可口革囊星虫酶解物经过Sephadex G-25凝胶过滤分离,得到四个峰,其中三峰的活性最高,为48.63%,组分Ⅲ被消化酶处理后,活性下降不大,说明仍具有较强的ACE抑制活性。结论本文对新鲜可口革囊星虫进行了一般成分和氨基酸成分的分析,可口革囊星虫氨基酸成分种类齐全,必须氨基酸含量丰富,并含有较高的糖原含量和蛋白含量;通过对六种常用蛋白酶的测定,筛选出碱性蛋白酶是最佳的酶解可口革囊星虫的蛋白酶;本实验采用对ACE抑制活性的检测方法,具有操作简便和准确性较高的优点,是一种方便可靠的检测手段;用碱性蛋白酶对可口革囊星虫蛋白进行酶解之后得到的酶解产物,具有良好的稳定性。
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