山西林区螟蛾总科识别数据库构建及美国白蛾环介导等温扩增快速鉴定

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应用经典解剖技术获得形态学鉴别特征,测定山西林区螟蛾总科昆虫DNA条形码,系统地整合分子生物学与形态学数据,按照分类系统编目,基于B/S(Browser/Server,浏览器/服务器)技术初步构建物种识别数据库框架,为基层林业有害生物的识别提供可靠依据,也为进一步开发有害生物识别APP提供数据资源。应用环介导等温扩增技术快速鉴定林业检疫性有害生物美国白蛾,建立简便易行快捷的快速识别技术。主要结果如下:汇总实验室已采集的螟蛾总科昆虫标本,共研究凭证标本283号,经典形态解剖表明,有37号标本隶属螟蛾总科7亚科16属24种。对每个物种的翅和外生殖器进行详细的图像采集,共获得物种特征图48幅,所有图像按照现有的分类系统整理,为构建数据库提供了翔实的形态解剖资料。以线粒体COⅠ基因片段为分子标记对283号标本进行DNA条形码研究,共获得了37个DNA条形码单倍型数据。将螟蛾总科的COⅠ基因测序结果分别与NCBI数据库和BOLD system v4数据库进行比对,Kimura 2-parameter遗传距离在0.0083-0.0196,反映出DNA条形码有很强的辅助鉴定效力,为形态学鉴定提供可靠的辅助手段。利用Microsoft Access 2021软件(SQL-可查询数据库)搭建形态特征与DNA条形码相结合的山西林区螟蛾总科物种识别数据库框架,使用者可通过对数据库中的物种特征进行比对以识别物种,为区域性昆虫物种识别数据构建提供数据资源和技术支持。根据NCBI数据库中以递交的美国白蛾基因序列组信息,构建美国白蛾环介导等温扩增引物筛选的候选基因库,经等温扩增条件优化,构建了美国白蛾环介导等温扩增最优体系,验证了所设计的引物的有效性以及该技术鉴定物种的特异性。
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