【摘 要】
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目的:探讨右美托咪定（dexmedetomidine,Dex）是否通过非经典细胞焦亡通路参与减轻小鼠脓毒症肾损伤。方法:选择健康清洁级ICR小鼠32只,雌性16只,雄性16只,8～12周龄,体重20～25g。采用随机数字表法将小鼠分为四组:对照组（C组）、脂多糖（LPS）组（L组）、LPS+Dex组（LD组）和LPS+Dex+阿替美唑（Ati）组（LT组）,每组8只,给药前小鼠称重,计算相应组别L
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目的:探讨右美托咪定（dexmedetomidine,Dex）是否通过非经典细胞焦亡通路参与减轻小鼠脓毒症肾损伤。方法:选择健康清洁级ICR小鼠32只,雌性16只,雄性16只,8～12周龄,体重20～25g。采用随机数字表法将小鼠分为四组:对照组（C组）、脂多糖（LPS）组（L组）、LPS+Dex组（LD组）和LPS+Dex+阿替美唑（Ati）组（LT组）,每组8只,给药前小鼠称重,计算相应组别LPS、Dex及Ati的用药剂量,均用生理盐水稀释至0.5ml。L组、LD组和LT组腹腔注射LPS 400μg/kg,8 h后腹腔注射LPS 10 mg/kg建立脓毒症肾损伤模型。L组于建模即刻、建模后0.5、2、2.5、4、4.5h腹腔注射生理盐水0.5ml;LD组于建模即刻、建模后2、4h腹腔注射生理盐水0.5ml,于建模后0.5、2.5、4.5 h分别腹腔注射Dex 40μg/kg;LT组于建模即刻、建模后2、4 h腹腔注射阿替美唑（Atipamezole,Ati）750μg/kg,于建模后0.5、2.5、4.5 h分别腹腔注射Dex 40μg/kg;C组在各对应时点腹腔注射等量生理盐水。所有小鼠于建立模型后24 h进行麻醉处死,随后立即取材。1.苏木素伊红染色（HE）法:观察肾组织切片病理结构,2.采用全自动生化分析仪:检测血清肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）浓度,3.化学发光法:测量肾皮质细胞三磷酸腺苷（ATP）和血清ATP浓度,4.ELISA法:检测肾组织中白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-18（IL-18）浓度,5.q RT-PCR法:检测肾组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1（caspase-1）、caspase-11、泛连接蛋白1（pannexin-1）、P2X7m RNA表达量,6.Western Blot法:检测肾组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1活性体（caspase-1p20）、caspase-11、pannexin-1、P2X7蛋白相对含量,7.TUNEL染色:记录肾小管上皮细胞凋亡细胞数,并计算细胞凋亡率。结果:注射LPS后各组蛋白印迹检测可见pannexin-1裂解条带。与C组比较,L组、LD组和LT组血清BUN、Scr、ATP浓度均明显升高（P＜0.05）,肾皮质细胞ATP浓度明显降低（P＜0.05）,肾组织IL-1β和IL-18浓度、肾组织caspase-1、caspase-11、P2X7、pannexin-1 m RNA表达量均明显升高（P＜0.05）,肾组织caspase-1p20、caspase-11、P2X7、pannexin-1蛋白含量均明显升高（P＜0.05）,肾小管上皮细胞凋亡率明显升高（P＜0.05）。与L组比较LD组血清Scr、BUN、ATP浓度均明显降低（P＜0.05）,肾皮质细胞ATP浓度明显升高（P＜0.05）,肾组织IL-1β浓度、肾组织caspase-1、caspase-11、pannexin-1 m RNA表达量均明显降低（P＜0.05）,肾小管上皮凋亡率明显降低（P＜0.05）;LD组和LT组肾组织IL-18浓度、肾组织caspase-1p20、caspase-11、pannexin-1蛋白含量、肾组织P2X7 m RNA表达量及蛋白含量均明显降低（P＜0.05）。与LD组比较,LT组血清BUN、Scr、ATP浓度均明显升高（P＜0.05）,肾皮质细胞ATP浓度明显降低（P＜0.05）,肾组织IL-1β和IL-18浓度、肾组织caspase-1、caspase-11、P2X7和pannexin-1 m RNA表达量均明显升高（P＜0.05）,肾组织caspase-1p20、caspase-11、P2X7、pannexin-1蛋白含量均明显升高（P＜0.05）,肾小管上皮细胞凋亡率明显升高（P＜0.05）。结论:Dex通过激动α2-肾上腺素受体减轻了LPS导致的脓毒症小鼠肾脏病理学损伤,降低肾组织IL-1β和IL-18浓度,降低肾小管上皮细胞凋亡率,可能通过非经典途径减轻了肾脏细胞焦亡。
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