禽流感（Avian influenza,AI）是由A型流感病毒引起的一种禽类病毒性传染病，不仅可导致禽类的大量死亡或生产性能的急剧下降，引起了世界养禽业巨大的经济损失，而且导致人类的感染和死亡，给人类的公共卫生安全造成了极大的威胁，引起了世界各国政府和普通民众的高度重视。其防制已直接关系到养禽业的持续稳定发展和人民的身体健康。虽然我国许多养鸡场使用禽流感灭活苗，在一定程度上控制了禽流感的流行，然而如何区分免疫鸡群与感染鸡群却成为当前面临的一大难题。现有研究表明，非结构蛋白及其抗体可以作为病毒感染机体的一个重要标记。禽流感感染鸡体内产生禽流感病毒结构蛋白抗体和非结构蛋白抗体，而免疫鸡体内主要产生结构蛋白抗体，利用这种抗体差异，可用检测鸡血清中是否含有非结构蛋白抗体来区分免疫鸡群与野毒感染鸡群。　　同时目前，禽流感的诊断有病原学诊断和血清学诊断两种。现有的诊断方法大多操作复杂，耗时费力，有的需要专业技术人员或昂贵的仪器设备，只有在相应的实验室里才能进行，难以满足现场、适时的快速检测要求。　　胶体金免疫层析方法是一种新型的检测方法，它是一种以条状纤维层析材料为固相载体，利用毛细作用原理，借助于胶体金显色的免疫学反应。这种方法具有操作简单、快速，分析结果清楚、易于判断，不需要专业人员操作，检测费用低等优点，因此，非常适用于现场检测以及自动化检测分析。　　本研究针对目前禽流感检测方法中存在的问题，运用胶体金免疫层析技术，利用禽流感病毒非结构蛋白NS1基因，建立可区分免疫鸡群与野毒感染鸡群的快速鉴别诊断方法，取得了如下研究成果。　　1．禽流感非结构蛋白(NS1)基因的原核表达及纯化将携带有禽流感病毒非结构蛋白基因(NS1)的pKG-NS1载体，转入大肠杆菌BL21 codon plus中进行高效表达，并将所得蛋白分别进行纯化，到了纯化的具有免疫学活性的NS1蛋白。　　2．抗鸡IgG Fc单克隆抗体的制备与纯化用本室以前研制成功的抗鸡IgG Fc单克隆抗体的杂交瘤细胞注射小鼠，产生腹水，通过辛酸-硫酸铵法纯化，获得了高纯度的抗鸡IgG Fc单克隆抗体。　　3．胶体金及免疫胶体金的制备本研究采用柠檬酸三钠还原法，成功确立了胶体金的制备条件；并利用制备的胶体金，对抗鸡IgG Fc单克隆抗体进行了胶体金标记条件的摸索，成功确立了其胶体金标记条件。最佳标记pH值分别为8.0，最佳标记量分别为10μg抗鸡IgG Fc单克隆抗体/mL胶体金。　　4．区分禽流感野毒感染鸡群与免疫鸡群的胶体金试纸条快速鉴别诊断方法的建立以胶体金标记鼠抗鸡IgG Fc单克隆抗体作为示踪物，用固定在检测线上的AIV-NS1抗原为捕获抗原，成功地建立了区分禽流感野毒感染鸡群与免疫鸡群的胶体金试纸条快速鉴别诊断方法。用制成的试纸条与禽流感野毒感染鸡血清反应后，检测线出现明显的紫红色条带，而与生理盐水(空白)、SPF鸡阴性血清、标准鸡新城疫病毒(ND)、鸡传染性法氏囊病毒(IBD)、鸡传染性支气管炎病毒(IB)等阳性血清及禽流感灭活油剂苗免疫鸡血清反应后，检测线不出现紫红色条带，说明本试纸条特异性高，与鸡的其他呼吸道疫病病毒抗体无任何交叉反应。说明本实验研制的试纸条可以用于鸡禽流感疫苗免疫与病毒野毒感染的鉴别诊断。