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目的:制备功能化单壁碳纳米管混悬液;评估碳纳米管的细胞毒性;评价鞘内注射功能化单壁碳纳米管/NR2B-siRNA复合物对福尔马林炎性痛小鼠的基因沉默效果。方法:(1)先用表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和超声方法,分散修饰不溶于水的单壁碳纳米管(SWNT)和羧基化单壁碳纳米管(SWNT-COOH)形成功能化单壁碳纳米管(f-SWNT)混悬液,将功能化单壁碳纳米管与NR2B-siRNA以不同质量比混合,静置后高速离心,取上清液行琼脂糖凝胶电泳,通过凝胶成像系统检测功能化单壁碳纳米管与NR2B-siRNA的结合情况。(2)培养Hela细胞,用细胞活力(MTT)法和细胞凋亡实验(Hochest33342)评估SWNTs、SWNT-COOH、CTAB及SWNT-COOH/CTAB的细胞毒性。(3)选取雄性C57BL/6小鼠40只,体重18-22kg,随机分为4组(n=10):空白组(C组),阴性对照组(N组),实验组(A组),阳性对照组(P组)。分别行鞘内注射,七天后建立福尔马林炎性痛小鼠模型,测定术后1h自发痛行为学改变,取脊髓L4-6节段采用RT-PCR法检测NR2BmRNA表达。结果:(1)表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)修饰羧基化单壁碳纳米管能形成较稳定的功能化单壁碳纳米管混悬,功能化单壁碳纳米管(f-SWNTs)能与NR2B-siRNA很好地结合,且达到饱和时二者结合的质量比为1:1.5-1:2之间。(2)材料学检查表明SWNTs含有更多的金属杂质;细胞活力和细胞凋亡实验发现羧基化修饰的单壁碳纳米管(SWNT-COOH)比原始单壁碳纳米管(SWNTs)毒性小,浓度曲线显示表面活性剂修饰后的羧基化单壁碳纳米管的毒性与表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)相关,在低浓度范围(0.5-50μg/ml)内CTAB和SWNT-COOH/CTAB基本无细胞毒性(细胞毒性分级为0-1级)。(3)对于福尔马林所致的Ⅰ相急性痛,所有组间的急性期伤害性反应无差别(P>0.05),阳性对照组(P组)和实验组(A组)小鼠对福尔马林所致的Ⅱ相痛的伤害性反应显著降低(P<0.02);阳性对照组(P组)和实验组(A组)小鼠脊髓NR2BmRNA表达均低于其他对照组(P<0.05)。结论:(1)十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)能较好地分散羧基化单壁碳纳米管(SWNTs)形成功能化单壁碳纳米管混悬液(f-SWNTs), f-SWNTs能与siRNA很好地结合。(2)单壁碳纳米管经羧基化后可降低毒性,SWNT-COOH/CTAB的细胞毒性存在剂量依赖性,在低浓度范围内(0.5-50μg/ml),基本无毒性,可以安全使用(细胞毒性分级为0-1级)。(3)鞘内注射功能化单壁碳纳米管用作基因载体能有效转染NR2B-siRNA,抑制小鼠脊髓NR2BmRNA的表达,减轻福尔马林Ⅱ相痛行为学。