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结直肠癌(CRC)是严重威胁人类健康的癌症之一,临床上的医治措施除了手术切除外有放疗与化学治疗。目前奥沙利铂作为结直肠癌的一线化疗药被广泛应用,在过去的几年里大大降低了结直肠癌的死亡率。然而由于结直肠癌化疗过程中奥沙利铂耐药的出现,很大程度上限制了CRC化疗的疗效。大量研究证明micro RNA(miRNA)表达异常与肿瘤发生发展以及癌症耐药的产生有关。研究目的:1)鉴定与CRC奥沙利铂耐药相关的miRNA及其靶基因。2)探究与耐药相关的miRNA及其靶基因的生物学功能。研究方法:1)以人结直肠癌细胞HCT116为基础材料,通过逐渐加大药物浓度联合高浓度刺激的方法构建奥沙利铂耐药株HCT116-R。2)通过转录组测序技术及小RNA测序技术对两株细胞中的差异miRNA与基因进行分析,再通过联合分析,筛选出与耐药相关的miRNA及其潜在的靶基因。3)通过瞬时转染的方法导入人工合成的miR-1254模拟物、抑制剂或干扰RNA来敲低或过表达相关靶点。4)利用q RT-PCR、CCK-8实验检测miRNA和基因对细胞耐药及增殖的影响。5)通过流式细胞术检测敲除或过表达相关靶点对细胞凋亡的影响。6)通过Transwell、划痕实验探究敲除或过表达相关靶点对细胞迁移侵袭能力的影响。结果:1)过表达miR-1254可显著减少细胞凋亡,增强HCT116细胞对奥沙利铂的耐药性,并抑制MEGF6和FBLN2的表达水平。2)抑制miR-1254的表达可加速细胞凋亡,降低HCT116-R细胞系对奥沙利铂的耐药性,增强MEGF6和FBLN2的表达。3)高表达的miR-1254抑制CRC细胞的迁移与侵袭,抑制miR-1254的表达后,CRC细胞的迁移与侵袭能力增强。4)敲低MEGF6增强了CRC细胞对奥沙利铂的耐药性,减少细胞凋亡。5)敲低FBLN2增强了CRC细胞对奥沙利铂的耐药性,抑制细胞的迁移和侵袭能力。结论:miR-1254通过抑制MEGF6的表达增强人结直肠癌细胞对奥沙利铂的耐药减少细胞凋亡;同时,miR-1254通过抑制FBLN2的表达增强CRC细胞对奥沙利铂的耐药并抑制细胞迁移侵袭能力。这些分子标记物的发现将对CRC的药物治疗提供一定参考。