【摘 要】
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三七茎叶中人参皂苷Rb3占茎叶总皂苷的20%以上,由于C-20位上连接有木糖基,而且没有水解木糖基的水解酶,所以人参皂苷Rb3的利用率并不高。本论文研究的主要内容是筛选出产生水
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三七茎叶中人参皂苷Rb3占茎叶总皂苷的20%以上,由于C-20位上连接有木糖基,而且没有水解木糖基的水解酶,所以人参皂苷Rb3的利用率并不高。本论文研究的主要内容是筛选出产生水解人参皂苷Rb3木糖基的木糖基水解酶的菌株,对其粗酶液进行分离纯化,并对纯化的酶进行酶学性质以及动力学常数进行研究。首先筛选出Absidia sp.P848r菌株可以产生木糖基水解酶,并对其发酵条件进行优化:发现在不加诱导物的麸皮浸出液培养基中加入0.4 mL菌种,培养96小时为最佳发酵条件。对粗酶液经过DEAE-Cellulose DE52阴离子层析纯化后,使用SDS-PAGE电泳进行纯度鉴定,得到单一的条带,并测得酶蛋白分子量约为66.7 kDa。对酶学性质进行研究发现:最适反应pH值为3.0,在pH2.08.0区域范围内保持稳定;最适反应温度40℃,在20℃60℃温度稳定性较好;金属离子K+、Na+、Mg2+、Mn2+、Ca2+离子对酶反应无明显作用,Zn2+、Pb2+、Ni2+对酶反应有抑制作用。反应动力学研究结果显示Km值为65.63mmol/L,Vmax为2.03 mmol/(h·L)。对酶的催化特性的研究发现利用该菌产粗酶液,就可对三七茎叶中含量丰富的人参皂苷Rb3进行生物转化,进而生成F2和C-K;并且纯化后的酶可以水解pNP-β-D-木糖苷。
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