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目的探究N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对乙醇致肝细胞损伤的保护作用。方法本研究通过建立乙醇致肝细胞损伤的模型结合加入不同剂量NAC预干预,探讨NAC在乙醇致肝细胞损伤中的保护作用及相关机制。实验分成如下五组:(1)Control组:正常对照组;(2)Hurt组:乙醇损伤组;(3)NAC-L组:1mM NAC+乙醇组(4)NAC-M组:2mM NAC+乙醇组(5)NAC-H组:5mM NAC+乙醇组。此外,为探索乙醇是否能造成肝细胞的氧化损伤,在氧化应激指标部分添加过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)组作为阳性对照组。根据不同乙醇浓度干预后细胞的存活率、乙醇脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量以及细胞形态变化情况确定乙醇损伤肝细胞模型的浓度。在干预组中预加入不同剂量NAC处理30min后,再加入建立乙醇致肝细胞损伤模型的乙醇浓度继续培养24h。各组完成以下指标:(1)利用MTT法检测各组细胞的存活率;(2)赖氏法检测天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙氨酸氨基转氨酶(alanine aminotransferase,ALT);(3)微量酶标法检测LDH;(4)收集各组细胞上清液,利用Elisa法,根据试剂盒说明书检测各组细胞上清液中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)的水平;(5)利用DCFH-DA探针法通过吸光度检测各组细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;(6)使用WST-8法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD);(7)使用DTNB法检测细胞中还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量;(8)通过hoechst染色观察细胞凋亡情况;(9)应用Western blot法检测丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPKs)通路中JNK、P38 MAPK总蛋白表达量及其磷酸化程度。结果(1)经过MTT法检测细胞存活率表明,NAC作用于张氏肝细胞的安全浓度范围为1-8mM。(2)在乙醇致肝细胞损伤的各浓度中,400mM组可以在保证细胞存活率达到75%左右的情况下并且对细胞有明显的损伤反应,故选用乙醇浓度400mM,损伤24h来建立乙醇致肝细胞损伤模型。(3)通过MTT法检测各组细胞的存活率,与乙醇致肝细胞损伤组相比,NAC预干预组可以提高细胞的存活率以及改善细胞形态。(4)NAC预干预可以降低细胞中AST、ALT、LDH的含量(P<0.05)。(5)NAC预干预可以降低各组细胞上清液的TNF-α含量(P<0.05)。(6)NAC预干预可以降低肝细胞中ROS、MDA水平(P<0.05),提高各组细胞中SOD以及GSH含量(P<0.05)。(7)各组细胞中JNK及P38 MAPK总蛋白量不受各处理因素的影响,但NAC预干预可以降低受损肝细胞的JNK及P38 MAPK磷酸化水平。结论NAC可以拮抗乙醇诱导的肝细胞损伤,这种保护作用可能通过改善肝细胞受损后的酶学指标,调节炎症水平,降低氧化应激损伤以及调节JNK、P38MAPK通路中相关蛋白的激活实现。这些结果可为NAC在酒精性肝病的预防治疗作用的研究提供科学依据。