目的:探讨黄芪甲苷（Astragaloside IV,AS-IV）调控Rho A通路对神经突起延伸的机制,为治疗缺血性脑卒中引发兴奋性氨基酸毒性造成神经突起损伤后的生长提供理论基础。方法:（1）采用CCK-8法分别检测不同浓度AS-IV和不同浓度谷氨酸（glutamate,Glu）作用于视网膜神经节细胞（RGCs）24h的存活率。（2）采用Pull-down和WB检测Rho A通路各蛋白的激活与谷氨酸损伤时间的关系。（3）AS-IV预处理RGCs 24 h,加入Glu共培养1h,流式细胞术检测RGCs细胞内Ca2+浓度,Pull-down和WB法检测各蛋白活性表达,细胞骨架染色观察神经突起和生长锥的变化。（4）Glu处理RGCs,提取不同时间点RGCs总蛋白,利用Western blotting检测Rho A通路和其下游蛋白表达。（5）AS-IV预处理RGCs 24 h,加入Glu分别共培养12 h、48 h,通过Real-time PCR、免疫荧光和Western blotting检测RGCs中Rho A、Rac1、Cdc42的表达（6）采用TUJ1和F-actin对RGCs进行细胞染色,共聚焦成像检测RGCs神经突起的变化。结果:（1）AS-IV毒理试验:浓度40μg/m L-160μg/m L之间时,细胞存活率逐渐降低,160μg/m L时细胞活性最低（****P＜0.01）,选择80μg/m L作为后续实验条件。Glu毒理试验:随着Glu浓度的增高,细胞活性逐渐降低。10 m M时细胞活性56.71%（****P＜0.01）,选择此浓度作为后续造模条件。（2）随着Glu损伤时间的延长,Rho A-GTP表达量逐渐升高,3h时表达量最高;Ccd42-GTP、P-PAK1、N-WASP、磷酸化LIMK和磷酸化cofilin蛋白表达量则逐渐下降,因此选择3h作为后续实验时间。（3）经过AS-IV干预后,Ca2+荧光强度降低14%（***P＜0.01）。Glu损伤RGCs 3h,Rho A-GTP升高,AS-IV干预作用下,与谷氨酸组对比,下降了24.15%（*P＜0.05）。Rac1-GTP、Cdc42-GTP、N-WASP、P-PAK1和P-cofilin在谷氨酸损伤后均下降;经过AS-IV干预作用下,与谷氨酸组相比,分别升高了64.55%、31.08%、2%、51.06%和49.47%（*P＜0.05,***P＜0.01）。谷氨酸组神经突起缩短,生长锥萎缩成球状,未见明显丝状伪足,AS-IV干预后神经突起延长,可见少量丝状伪足。（4）Rho A蛋白及其下游分子的动态变化:Rho A、Cdc42、Rac1在Glu损伤12 h时均高表达,后随着时间延长逐渐降低,48 h时表达量最低,而Rho A蛋白的下游效应分子ROCK则随着时间的延长磷酸化表达逐渐升高,在损伤48h时表达量最高。（5）Glu损伤RGCs 12 h,Rho A蛋白及基因表达明显增高,AS-IV干预则下降;Cdc42蛋白和基因表达均升高,而AS-IV的干预并无明显差异;Rac1的基因表达损伤后下降,AS-IV干预表达量升高。Glu诱导48h后,Glu组的Rac1和Cdc42蛋白表达量下降（****P＜0.01）,AS-IV干预后表达量均上调（**P＜0.01）。（6）Glu诱导48 h后,RGCs胞体膨大变圆,AS-IV组胞体膨大变圆数量较少,神经突起伴有许多丝状物。结论:本研究通过Glu激活RGCs细胞Rho A信号通路,明确了Glu对RGCs轴突兴奋性损伤不同阶段的认识。发现Glu诱导RGCs轴突损伤与Rho A信号通路的激活呈时间依赖性变化。利用AS-IV抑制Rho A通路,结果表明抑制Glu可以显著降低Rho A活性及蛋白表达和提高Rac1和Cdc42蛋白的活性及蛋白表达,即AS-IV拮抗Rho A诱导的生长锥塌陷,促进片状伪足和丝状伪足的形成。为缺血性脑卒中神经保护和神经突起生长治疗提供理论指导。