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选取初重分别为9-12 g的珍珠龙胆石斑鱼(Epinephelus lanceolatus♂×E.fuscoguttatus♀)为研究对象,进行8周的养殖实验,通过评估酶解鸡浆与珍珠龙胆石斑鱼幼鱼生长、血清生化指标和肠道功能的相关性,探究酶解鸡浆对珍珠龙胆石斑鱼健康生长的影响;通过评估珍珠龙胆石斑鱼饲料大豆浓缩蛋白水平与其生长、饲料利用、肝脏抗氧化和肠道免疫等指标寻求满足鱼体最大限度利用大豆浓缩蛋白的比例。本文实验研究结果如下:(1)饲料中添加酶解鸡浆对珍珠龙胆石斑鱼生长和血清生化的影响选取珍珠龙胆(初始体重为9.7±0.01 g)随机分为3组,每组3个重复,分别为对照组(C)、3.5%酶解鸡浆1(E1)添加组和3.5%酶解鸡浆2(E2)添加组。结果显示,E2组的增重率、特定生长率和肥满度显著高于C组和E1组(P<0.05),而C组与E1组间无显著差异(P>0.05);酶解鸡浆添加组血清葡萄糖水平显著降低(P<0.05),E1组血清总胆固醇水平显著升高(P<0.05),而E2组总胆固醇水平高于C组,但无显著性差异(P>0.05),E2组的低密度脂蛋白胆固醇水平显著降低(P<0.05),与E1组无显著差(P>0.05)异;E2组累计死亡率最高且显著高于对照组(P<0.05),而E1组与C组无显著差异(P>0.05)。研究表明,E2在提高珍珠龙胆石斑鱼生长的生长性能方面优于E1;饲料中添加E1和E2会降低珍珠龙胆石斑鱼的抗病力。(2)饲料中添加酶解鸡浆对珍珠龙胆石斑鱼肠道功能的影响对前一章节生长实验中珍珠龙胆石斑鱼肠道进行组织切片观察和微生物多样性分析。结果显示,与C组相比,E1组和E2组的前肠ZO-1、ZO-2、ZO-3、occludin和claudin-3基因表达水平显著升高(P<0.05),而claudin-12和claudin-15基因表达水平无显著变化(P>0.05);E1组中肠ZO-3和caludin-3基因表达水平显著降低(P<0.05),claudin-12显著升高(P<0.05),E2组ZO-1、ZO-2、occludin、claudin-3、claudin-12和claudin-15均显著降低(P<0.05);E1组和E2组后肠ZO-1、ZO-2、ZO-3、claudin-3、claudin-12和claudin-15的基因表达量均显著降低(P<0.05),E1组occludin的基因表达水平显著升高(P<0.05),而E2组Occludin的基因表达水平显著降低(P<0.05)。与C组相比,E1组的前肠皱襞宽度显著降低(P<0.05),皱襞高度和肌层厚度无显著变化(P>0.05);E1组的中肠肌层厚度降低且显著低于E2组(P<0.05);E1组和E2组的后肠皱襞高度显著降低(P<0.05),E1组的后肠皱襞宽度显著降低(P<0.05)。与C组相比,E1和E2组明显降低了Shannon指数、OTUs数;在属的水平上,芽孢杆菌属(Bacillus)、不动杆菌属(Acinetobacter)组成了核心微生物菌属;E1组和E2组增加了芽孢杆菌属的丰度,降低了不动杆菌属的丰度。研究表明,饲料中添加酶解鸡浆对珍珠龙胆石斑鱼前肠具有促进发育的作用,而对中、后肠造成损伤;降低肠道微生物丰度,能够提高肠道有益菌的丰度。(3)转录组测序分析饲料中添加酶解鸡浆对珍珠龙胆石斑鱼肠道基因表达的影响对前期生长实验中珍珠龙胆石斑鱼肠道进行转录组分析。结果显示,共得到111196条Unigene,其中有36295条Unigene比对到四大注释库(Nr,Swissport,KOG和KEGG)。E1组与C组差异表达基因共1926个,其中上调1355个,下调571个;E2组与C组差异表达基因共550个,其中上调383个,下调167个。E1组和对照组差异基因中,GO注释二级分类可分为47个亚类,注释到binding,cell process和catalytic activity上的基因较多;E2组和对照组差异基因中,GO注释二级分类可分为34个亚类,注释到binding,single-organism process和cell process上的基因较多.KEGG富集显示,E1组和C组差异表达基因较多集中在磷脂酰肌醇信号系统和甘油磷脂代谢;E2组和C组差异表达基因较多集中在氨基酸代谢。基于此,我们推测,酶解鸡浆可能改变机体氨基酸和磷脂酰肌醇信号系统相关基因的表达来影响珍珠龙胆石斑鱼的生长性能,但具体的作用机制还有待深入研究。(4)大豆浓缩蛋白替代鱼粉对珍珠龙胆石斑鱼生长、肝脏抗氧化和免疫的影响选取珍珠龙胆石斑鱼(初重为12.5±0.25 g)随机分为8组,每组4个重复,分别投喂大豆浓缩蛋白替代鱼粉蛋白水平为0%(对照组,FM)、11%(S11)、22%(S22)、33%(S33)、44%(S44)、55%(S55)、66%(S66)和77%(S77)的饲料。结果显示,珍珠龙胆石斑鱼的末均重、增重率、特定生长率和存活率在替代水平达到44%前未受到显著影响(P>0.05),之后显著下降(P<0.05);随着替代水平升高,饲料系数呈显著上升趋势(P<0.05),而蛋白质效率呈下降趋势,且最高替代组显著低于对照组(P<0.05);肝脏超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、总抗氧化能力、补体C3和C4均呈先上升后下降的趋势。超氧化物歧化酶和总抗氧化能力在S55组最高、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶分别在S22和S33组最高,并皆显著高于对照组(P<0.05);肝脏丙二醛含量呈下降趋势,且S22,S33,S66和S77组显著低于FM组(P<0.05);S11,S22,S33,S44,S55和S66组的补体C3和C4均显著高于鱼粉组(P<0.05);鱼粉组的溶菌酶活性最低,并显著低于其余各组(P<0.05)。研究表明,以增重率和大豆浓缩蛋白替代鱼粉水平为依据进行折线模型分析,珍珠龙胆石斑鱼饲料中大豆浓缩蛋白替代鱼粉的最适水平为37.23%。(5)大豆浓缩蛋白替代鱼粉对珍珠龙胆石斑鱼肠道功能的影响对前一章节生长实验中珍珠龙胆石斑鱼肠道进行消化酶活性测定、组织切片观察和相关免疫基因表达分析。结果显示,随着替代水平的升高,各组间肠道脂肪酶和胰蛋白酶无显著影响(P>0.05),而α-淀粉酶呈先上升后下降的趋势,并在S44组达到最大值,且显著高于FM组(P<0.05);S55、S66和S77组的皱襞高度和肌层厚度显著低于其余各组(P<0.05),但在替代水平不高于44%时,各组均无显著差异(P>0.05);前肠TLR22,My D88和p65的基因表达水平呈先上调后下调的趋势,最高值分别出现在S55,S44和S44组,且显著高于FM组(P<0.05),IL-1β、TNF-α、IL-12P40、IFN-γ和IL-6的基因表达水平在替代水平分别达到77%、66%、55%、33%和66%前均呈显著上调趋势(P<0.05),TGF-β、IL-10、epinecidin和MHCⅡβ的基因表达水平在替代水平分别达到66%、66%、66%和55%前呈显著上调趋势(P<0.05),hepcidin的基因表达水平在S33组最高,且显著高于其余各组(P<0.05);中肠TLR22的基因表达水平呈上升趋势,但各组间无显著差异(P>0.05),My D88和p65的基因表达水平呈先上调后下调的趋势,最高值皆出现在S44组,且显著高于FM组(P<0.05),IL-1β、TNF-α、IL-12P40和IFN-γ的基因表达水平在替代水平分别达到77%、77%、55%和77%前均呈显著上调趋势(P<0.05),IL-6的基因表达水平呈下调趋势,且S11组显著低于FM组(P<0.05),TGF-β、IL-10和MHCⅡβ的基因表达水平在替代水平分别达到11%、33%和33%前均呈显著上调趋势(P<0.05),epinecidin的基因表达水平在替代水平高于55%后显著下调(P<0.05);FM组后肠TLR22的基因表达水平显著高于其余各组(P<0.05),My D88和p65的基因表达水平呈先上调后下调的趋势,最高值分别出现在S55和S22组,且显著高于对照组(P<0.05),IL-1β、TNF-α、IL-12P40和IFN-γ的基因表达水平在替代水平分别达到22%、55%、11%和22%前均呈显著上调趋势(P<0.05),IL-6的基因表达水平呈先上调后下调的趋势,在S33组出现最高值,且显著高于其余各组(P<0.05),TGF-β、IL-10、epinecidin、MHCⅡβ和hepcidin的基因表达水平在替代水平分别达到55%、77%、66%、55%和66%前均呈显著下调趋势(P<0.05)。研究表明,大豆浓缩蛋白替代部分鱼粉能够提高肠道消化能力,但大量替代鱼粉会破坏肠道结构,激活前、中肠TLR22/My D88/NF-κB信号通路,引起肠道免疫反应。