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目的探究皮肤驻留调节性T细胞(Tregs)对烧伤创面愈合的作用及双网络水凝胶生物材料在体内刺激条件下对皮肤驻留调节性T细胞的功能影响。方法根据实验目的将实验分为两部分。在第一部分中探究皮肤Treg细胞对烧伤创面的愈合作用时,分别设置转基因鼠(基因型为Foxp3DTR型)-白喉毒素(DT)注射组(F-DT组)(n=40)和野生型(WT)-白喉毒素注射组(C-DT组)(n=40)。两组内再依据随机数字表法将小鼠分别分为早期组与晚期组。每组的早期组分别于烧伤前1天(D-1)、烧伤后1天(D1)、第3天(D3)对小鼠进行腹腔内注射DT;每组的晚期组分别于烧伤后5天(D5)、7天(D7)、9天(D9)注射DT。于烧伤后D0、D3、D5、D7、D9、D11对小鼠创面进行拍照,数字化测量不同时间点伤口的面积以评估伤口的愈合率;流式细胞术分析F-DT组较对照组的皮肤Treg细胞浸润及功能表达变化情况;于烧伤后第7天处死小鼠,采用H&E染色于光镜下观察肉芽组织增生及再上皮化情况。在第二部分中探究乙二醇壳聚糖(GC)/海藻酸钠(Alg)双网络生物材料在体内刺激条件下对皮肤Tregs的功能影响时,将80只C57BL/6野生型小鼠依据随机数字表法随机分为2组:对照(Control)组(n=40)和双网络水凝胶生物材料组(n=40)。材料组小鼠在烧伤后将GC/Alg凝胶固定于创面上。分别于烧伤后D0、D3、D5、D7、D9、D11对小鼠创面拍照并计算伤口面积及愈合率;流式细胞术分析对照组及材料组每个时间点皮肤Tregs细胞局部浸润及功能表达变化情况。结果首先,与C-DT早期组[D3(-0.16±0.04)%]相比,F-DT早期组创面愈合率显著降低[D3(-0.23±0.03)%](P<0.05);与C-DT晚期组[D3(-0.15±0.01)%]相比,F-DT晚期组[D3(-0.16±0.03)%]创面愈合率变化无明显差异(P>0.05),F-DT早期组对7-11天伤口愈合的作用较F-DT晚期组作用明显。通过GC/Alg双网络生物材料在烧伤创面固定以在体内刺激皮肤驻留Tregs后,与对照组[D5(-0.09±0.04)%]相比,材料组[D5(0.18±0.03)%]创面愈合率显著增高(P<0.05);流式细胞术分析Tregs局部浸润时,对照组内烧伤后皮肤CD4+Foxp3+T细胞D5组[(10.59±1.77)%]较D0组[(1.5±0.65)%]表达明显增加,CD25+Tregs D3组[(18.77±3.49)%]较D0组[(10.04±0.39)%]表达明显增加;经GC/Alg体内刺激后,与对照组D3[CD4+Foxp3+T细胞(8.21±2.61)%、CD25+Tregs(18.77±3.49)%]相比,材料组皮肤CD4+Foxp3+T细胞在烧伤后3天局部创面浸润[(22.44±2.83)%]明显增加,CD25+Tregs在烧伤后3天局部创面浸润[(64.74±3.31)%]明显增加。功能表达方面,对照组内CD4+Foxp3+T细胞的CTLA-4表达水平D3组[(18.33±4.78)%]较D0组[(11.76±0.5)%]明显增加,ICOS的表达水平D3组[(19.27±2.15)%]较D0组[(5.74±0.83)%]明显增加;经GC/Alg体内刺激之后,与对照组D3[CTA-4(18.33±4.78)%、ICOS(19.27±2.15)%]相比,材料组Tregs中CTLA-4的表达水平[(58.09±4.74)%]明显增加,ICOS的表达水平[(54.08±4.33)%]明显增加,总的来说,结果差异比较具有统计学意义(P<0.05)。结论1.皮肤调节性T细胞是皮肤创面愈合过程中的重要成份,其主要早期(烧伤后3天)作用于烧伤皮肤创面,并决定晚期愈合过程的愈合速率;2.双网络生物材料GC/Alg可以通过促进皮肤Tregs的局部浸润和功能表达来促进烧伤创面的愈合过程。