苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）产生的杀虫晶体蛋白可以特异性杀死多种农业害虫而不会对非靶标生物或环境造成影响。因此,Bt生物制剂和转基因Bt作物已被广泛应用于害虫防治。然而,田间不同害虫已发展出对Bt制剂或Bt作物的高水平抗性,严重威胁Bt生物技术产品的可持续应用。小菜蛾（Plutella xylostella（L.））是一种全球性的为害十字花科作物的害虫,也是首个被记录的田间进化出对Bt生物农药产生抗性的昆虫。最近多项研究表明包括PxABCB1和PxABCG1在内的多种Bt Cry1Ac毒素中肠受体基因的表达量下调会减少毒素和受体之间的相互作用,导致小菜蛾对Bt毒素产生抗性。但是,这些中肠受体基因的转录调控机制仍然知之甚少。本文进一步研究小菜蛾Bt Cry1Ac中肠受体基因PxABCB1和PxABCG1差异表达的转录调控机制,发现MAPK信号通路激活的转录因子PxJun通过抑制PxABCB1的表达提高小菜蛾对Cry1Ac毒素的抗性,而PxABCG1基因启动子上顺式作用元件的突变参与小菜蛾对Cry1Ac毒素的抗性。研究结果有助于进一步理解中肠Bt受体基因的转录调控机制和昆虫Bt抗性分子机制,对于Bt生物技术的可持续应用和昆虫Bt抗性田间治理具有重要的理论和实践意义。本文的主要研究内容和结果如下:（1）小菜蛾PxABCB1启动子的克隆与活性分析基于小菜蛾的基因组数据库,首先克隆获得Cry1Ac敏感种群DBM1Ac-S和抗性种群NIL-R的PxABCB1基因的启动子序列。通过双荧光素酶报告基因实验检测启动子活性,发现敏感与抗性种群中PxABCB1基因启动子活性无明显差异。随后构建敏感种群精细截短的启动子重组质粒检测关键活性调控区。（2）转录因子PxJun负调控PxABCB1启动子的活性通过在线软件预测PxABCB1基因关键调控区中潜在的转录因子结合位点。为检测这些转录因子对启动子活性的影响,分别克隆这些转录因子的编码区序列,构建相应的表达载体并进行双荧光素酶报告基因实验。结果表明PxJun对启动子活性有显著的抑制作用。对预测到的Jun结合位点（JBS）进行突变或缺失导致PxJun无法抑制PxABCB1基因启动子的活性。酵母单杂交实验（Y1H）进一步验证PxJun与JBS的直接相互作用。（3）受MAPK信号通路激活的PxJun负调控PxABCB1的表达并增强小菜蛾对Cry1Ac毒素的抗性实时荧光定量（qPCR）检测发现PxJun基因在小菜蛾不同的组织和龄期中均有表达。此外,所有抗性种群小菜蛾中肠组织中PxJun基因的表达水平均高于敏感种群。抗性种群NIL-R中PxJun基因的沉默显著提高PxABCB1基因的表达水平并增强幼虫对Cry1Ac毒素的敏感性,而PxMAP4K4基因的沉默则显著降低中肠PxJun基因的表达并提高PxABCB1基因的表达水平。（4）小菜蛾PxABCG1启动子的克隆与活性分析基于小菜蛾的基因组数据库,首先克隆PxABCG1基因启动子,并确定敏感启动子主型S1和S2及抗性启动子主型R2。双荧光素酶报告基因实验结果表明S1和S2的启动子活性均显著高于R2。对启动子进行进一步截短,确定-972至-891是导致启动子差异活性的关键区域。核酸序列比对分析结果表明该区域存在一个单核苷酸多态性位点（SNP）。进一步的转录因子结合位点预测发现在敏感种群中存在Antp/Dfd的结合位点,但在抗性种群中该碱基的突变导致这一结合位点的消失。（5）转录因子Antp参与PxABCG1基因的表达调控为了解Antp和/或Dfd是否调控PxABCG1基因,分别克隆转录因子的编码区序列,构建表达载体并进行双荧光素酶报告基因实验。结果表明,Antp对S1有显著的激活作用,而对R2几乎无影响。对S1预测到的Antp结合位点（CRE）进行突变或缺失,显著降低Antp对启动子的激活作用。Y1H实验进一步验证Antp与正常CRE而非突变CRE的相互作用。通过RNAi实验沉默Antp的表达后,敏感种群中PxABCG1的表达量显著降低,而抗性种群中PxABCG1的表达量无明显变化。这些结果表明PxABCG1基因启动子上的顺式作用元件突变导致Antp无法调控PxABCG1,从而降低PxABCG1基因的表达水平。