基于Hsp90与LRP-1结构的促细胞迁移活性肽筛选和作用机制研究

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伤口愈合是生长因子、细胞因子以及相关组织细胞等多方面参与的生理修复过程。异常的伤口愈合如过度愈合形成瘢痕或慢性伤口形成溃疡,均会对机体造成较大伤害。细胞迁移是伤口愈合中的限速事件,在伤口愈合过程中发挥重要作用。当组织受损时,细胞可释放热休克蛋白90α(Hsp90α)促进细胞迁移,通过跨膜蛋白低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)传导细胞运动信号,加速伤口修复。胃溃疡是常见的消化系统疾病,它的修复是一个复杂的伤口愈合过程。目前针对消化性溃疡的治疗,主要集中于质子泵抑制类(PPIs)药物,但存在过度使用的情况,并且会产生严重的副作用,且停药后复发率较高。基于此现状,开发一种新型的疗效好且毒性小的促伤口愈合药物变得十分迫切。食源性小分子多肽来源广泛且具有独特的优势,如更易被机体吸收,几乎无毒副反应等。不仅具有营养价值,还具有生物活性。蛋清多肽是从蛋清粉中制备的一种食源性多肽,它的多种功能已被研究,但关于细胞迁移和伤口修复的报道却很少,因而探究可加速伤口修复的蛋清多肽具有重要意义。实验室前期工作已经证明蛋清肽KR-9(KPHAEVVLR)、LN-6(LRDILN)、IL-6(INFEKL)可以促进皮肤的伤口愈合,在此基础上,我们进一步研究蛋清肽对其他组织或器官的伤口修复作用。首先,我们运用海肾荧光素酶双分子互补(SRL-PFAC)技术,以Hsp90/LRP-1复合物为靶点,同时运用小室迁移实验同步筛选促细胞迁移的多肽序列,筛选出效果较好的多肽SE-6(SRLYAE)、SS-8(SAESLKIS)、LR-(6 LYAEER)和RE-7(RYPILPE)后,进一步用梯度浓度的多肽做细胞小室迁移和划痕创伤愈合实验去验证多肽的促迁移效果。接下来,我们用相应细胞株,做MTS细胞活力实验,验证药物安全性的同时,也确认药物是否会引起细胞的过度增殖,造成过度的伤口愈合。之后,我们运用免疫印迹实验来研究多肽促细胞迁移和增殖的作用机制。体外实验初步完成后,为了验证多肽是否会对胃溃疡小鼠的溃疡修复具有促进作用,我们选择其中促迁移能力较强的多肽SS-8,通过体内实验进一步证明它的效果。通过造胃溃疡小鼠模型,并对其进行给药治疗,通过小鼠体重变化、胃组织形态学观察、HE染色病理分析和血清IL-6水平的测定,比较各组小鼠之间的差异,从不同维度来分析小鼠胃溃疡的愈合情况,评估SS-8对溃疡愈合的作用。基于以上研究,本文筛选出能够促细胞迁移的4种蛋清多肽,分别为SS-8、SE-6、LR-6和RE-7,为今后研发治疗伤口愈合的药物提供了科学的理论支持;也为未来蛋清粉多肽作为功能性保健品的开发利用,开辟了一条全新的道路。
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