二甲双胍通过抑制卵巢癌细胞自噬来抑制顺铂耐药的研究

来源 :锦州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wsmkt
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的自噬是以胞质空泡化为特征的溶酶体依赖的降解途径,可降解细胞质中受损的结构,使细胞能够适应缺氧、饥饿等条件[1]。在卵巢癌化疗过程中,自噬可以介导卵巢癌细胞对化疗药物[2]的耐药。二甲双胍不仅能抑制多种水解酶的活性,还能稳定溶酶体膜、白细胞膜等多种膜结构。二甲双胍是否能通过调节自噬逆转卵巢癌耐药、铂耐药尚未见报道。我们发现二甲双胍可以抑制化疗药物引起的卵巢癌细胞自噬,提高卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性。二甲双胍可通过抑制Akt磷酸化来消除自噬介导的耐药,抑制自噬。我们的研究揭示了二甲双胍对自噬的调控作用及其具体机制,为临床解决肿瘤耐药问题提供了新的方向。方法常规培养卵巢癌A2780和SKOV3细胞株,采用空白对照、二甲双胍、顺铂以及二甲双胍联合顺铂对两种细胞株分别给予干预,构建卵巢癌裸鼠模型,通过MTT还原法检测各组细胞存活情况,Western blot检测二甲双胍作用前后各组细胞自噬相关蛋白LC3-II、凋亡相关基因Bcl-2、cleaved-caspase-3以及PI3-K/Akt信号通路的表达情况和应用PI3-K/Akt抑制剂LY294002后,PI3-K/Akt信号通路的表达。实时定量PCR分析检测各组细胞中自噬相关基因Atg7,Atg5和Beclin1的m RNAs表达水平,应用SPSS19.0版统计分析软件进行统计分析。结果1.MTT法检测显示,单独用顺铂和二甲双胍刺激时卵巢癌细胞株A2780和SKOV3中存活细胞的数量,在顺铂与二甲双胍联合使用后,存活细胞的数量明显减少。2.Western blot检测发现用顺铂刺激卵巢癌细胞A2780和SKOV3,可诱导LC3-II表达增加,加入二甲双胍可显著抑制LC3-II表达的增加。二甲双胍促进顺铂诱导的卵巢癌细胞抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平降低,以及cleaved-caspase-3的表达水平增加。卵巢癌细胞株A2780和SKOV3中,顺铂联合二甲双胍可以抑制Akt分子的磷酸化,顺铂联合二甲双胍与PI3-K/Akt抑制剂LY294002联合可以抑制卵巢癌细胞系Akt磷酸化和LC3-II表达。3.实时定量PCR分析检测各组细胞中自噬相关基因Atg7,Atg5和Beclin1m RNA的表达水平,在A2780和SKOV3卵巢癌细胞中,在二甲双胍顺铂联合治疗后的细胞中的Atg7,Atg5和Beclin1 m RNA的表达水平均显著下降,单用顺铂组与二甲双胍顺铂联合组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论1.二甲双胍可降低顺铂诱导的卵巢癌细胞增殖2.二甲双胍可通过抑制LC3-II的表达抑制自噬3.二甲双胍可促进顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡4.二甲双胍通过抑制自噬相关基因m RNA转录从而抑制自噬5.二甲双胍通过抑制PI3-K/Akt信号通路影响自噬
其他文献
目的乳腺癌的治疗多以手术为主,化疗、放疗、内分泌治疗及靶向治疗是重要的辅助治疗手段。近年来,免疫治疗在乳腺癌的治疗中也得到了高度重视,并逐渐应用于临床。以上方法的综合应用大大降低了乳腺癌的复发率和死亡率。随着诊疗技术的不断发展,早期乳腺癌患者日渐增多,很多低复发风险luminal A型乳腺癌患者如何选择术后辅助治疗,成为人们关注的焦点。近年来,有学者发现了21基因检测及复发分数(RS)对于早期lu
目的利用GEO数据库的高通量数据挖掘与乳腺癌早期诊断有关的分子标志物,并且探索目的基因的作用方式。方法1.通过检索GEO数据库,得到了三个与乳腺癌早期诊断相关的最优数据集GSE29431、GSE21422、GSE22544。2.将数据集分别用GEO2R分析后,筛选出三组差异表达基因,通过共词分析得出三组数据集共同的差异表达基因。3.将共同差异表达基因进行GO生物功能富集分析和KEGG信号通路富集分
目的研究氯喹抑制梓醇对人胃癌AGS细胞自噬的作用后对梓醇促进胃癌细胞凋亡能力的影响。方法分别使用10、20、40、80、160μmol/L浓度的梓醇处理AGS细胞24h,采用CCK-8法观察梓醇(Catalpol)对AGS胃癌细胞增殖的抑制作用;Western blot检测梓醇对自噬相关蛋白LC3B、Beclin-1和ATG12蛋白表达的影响;Western blot法检测梓醇与自噬抑制剂氯喹(C
目的观察环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)在人神经胶质瘤细胞中的表达水平,探讨circHIPK3通过海绵吸附微小RNA-124-3p(mi R-124-3p)作用对促进神经胶质瘤细胞增殖与侵袭的分子机制及意义,为寻求神经胶质瘤的生物学特点及潜在治疗靶点提供理论依据。方法选取2015年12月至2019年03月间在我院神经外科接受治疗的神经胶质瘤病例为研究对象,遵循纳入标准和排除
目的免疫细胞治疗被认为是目前在抗肿瘤领域中最有潜力、并处于高速发展阶段的治疗技术,尤其是嵌合抗原受体T细胞疗法(CAR-T细胞疗法)。尽管CAR-T细胞疗法已在血液瘤中获得十分显著的疗效,但其在实体瘤中的应用依然极具挑战性。与T细胞类似地,巨噬细胞作为一种具有强大吞噬功能的免疫细胞,也具备杀伤肿瘤细胞的潜能。这提示我们,如果能有效地利用巨噬细胞的这一潜能,将有望为免疫细胞治疗技术的研究,特别是在针
目的IL-10是具有多重效应的细胞因子,作用于抗原递呈细胞或者CD4+T细胞在抗感染免疫中起免疫调节作用,直接作用于CD8+T细胞在抗肿瘤免疫中则起免疫活化作用。迄今对IL-10+CD8+T细胞中的了解有限。我们使用IL-10e GFP报告基因小鼠,通过体外培养的方式诱导CD8+T细胞产生IL-10,然后分选出IL-10e GFP阳性和IL-10e GFP阴性的CD8+T细胞,对这两组细胞进行RN
目的探究载脂蛋白E(ApoE)基因多态性、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)亚类与肝癌的易感性、鉴别价值和发生风险因素的关系,为肝癌早期诊断和风险评估提供依据。方法选取我院2018年12月至2020年12月113例原发性肝癌患者和同期70例乙型病毒性肝炎患者,体检中心健康体检者80人,将其分组为肝癌组、肝炎组和对照组。采集血清分别用基因芯片法和蛋白电泳法检测ApoE基因多态性和LDL、
目的p120ctn家族参与稳定细胞黏附连接,在维持细胞桥粒中起到重要作用,该家族很多成员在肿瘤发生及发展中起到重要作用,Plakophilin 2蛋白是p120ctn家族成员之一,推测也可能对肿瘤的发生及发展起到重要作用,但目前关于该蛋白的研究较少,特别是与食管鳞状细胞癌患者的预后研究更少。此次研究主要探讨食管鳞状细胞癌中Plakophilin 2蛋白的表达及其与食管癌患者预后之间的关系。方法使用
目的研究MICAL-L2在结直肠癌细胞中的作用并初探其潜在的分子机制。方法首先,通过q-PCR和免疫组织化学染色法评估MICAL-L2在结直肠癌组织中的表达水平,并分析MICAL-L2与结直肠癌患者临床病理参数的关系;采用细胞划痕实验、流式细胞术和软琼脂克隆形成实验检测MICAL-L2对结直肠癌细胞迁移和细胞周期的影响;通过构建稳定细胞株,利用裸鼠荷瘤实验,进一步从体内实验角度检测MICAL-L2
目的探究IL-4对胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其可能的作用机制。方法体外传代培养胃癌SGC7901细胞。将细胞分为对照组、IL-4组、IL-4+AS1517499组、AS1517499组。外源性IL-4终浓度分别为5、10、20、30、40ng/ml。STAT6特异性抑制剂AS1517499终浓度为1.2μmol/L。饥饿培养48h后采用MTT实验检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检