【摘 要】
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目的免疫细胞治疗被认为是目前在抗肿瘤领域中最有潜力、并处于高速发展阶段的治疗技术,尤其是嵌合抗原受体T细胞疗法（CAR-T细胞疗法）。尽管CAR-T细胞疗法已在血液瘤中获得十分显著的疗效,但其在实体瘤中的应用依然极具挑战性。与T细胞类似地,巨噬细胞作为一种具有强大吞噬功能的免疫细胞,也具备杀伤肿瘤细胞的潜能。这提示我们,如果能有效地利用巨噬细胞的这一潜能,将有望为免疫细胞治疗技术的研究,特别是在针
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目的免疫细胞治疗被认为是目前在抗肿瘤领域中最有潜力、并处于高速发展阶段的治疗技术,尤其是嵌合抗原受体T细胞疗法（CAR-T细胞疗法）。尽管CAR-T细胞疗法已在血液瘤中获得十分显著的疗效,但其在实体瘤中的应用依然极具挑战性。与T细胞类似地,巨噬细胞作为一种具有强大吞噬功能的免疫细胞,也具备杀伤肿瘤细胞的潜能。这提示我们,如果能有效地利用巨噬细胞的这一潜能,将有望为免疫细胞治疗技术的研究,特别是在针对实体瘤的治疗中,提供新的思路。本论文拟以CAR技术改造巨噬细胞,从而探讨嵌合抗原受体巨噬细胞（CAR-Mφ）作为一种新型抗肿瘤疗法的可能性。方法为了从概念上探讨将CAR技术应用于巨噬细胞用以抗肿瘤的可能性,我们将借鉴CAR-T的成熟CAR结构,以CD19-CAR为胞外段、CD8分子的跨膜区、不同活化性受体的胞内活化基序作为胞内结构域构建不同的备选CAR分子;通过流式细胞术检测经过不同CAR分子改造后的巨噬细胞的体外肿瘤吞噬能力;并测试其在与小分子药物联用中的抗肿瘤效应;同时尝试将经过CAR分子改造的巨噬细胞联合CAR-T进行肿瘤治疗,观察二者是否具有协同效应。结果构建的三种CD19 CAR质粒均能在小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）表面表达,并且在体外实验中可看到比较明显的吞噬/杀伤作用;在体外实验中,小分子药物氯化锰与CAR-BMDM联用时能看到较明显的增强作用;在体外实验中,CAR-BMDM与小鼠CAR-T联用则能看到明显的协同作用。利用Ad5F35腺病毒能将NKG2D CAR转染到人原代巨噬细胞中,使之增强对NKG2D配体阳性肿瘤细胞的杀伤作用,但在与NKG2D CAR-T联用中尚未观察到明显增效作用。结论通过使巨噬细胞表达CAR分子,使之成为具有肿瘤靶向杀伤功能的效应细胞是可行性的;Fc R-gamma作为CAR-M的胞内域具有较好的杀伤肿瘤细胞的效果;锰离子能增强CAR-M杀伤肿瘤细胞的效果;在小鼠体系中,CAR-M能协同CAR-T对肿瘤细胞的的杀伤作用。巨噬细胞表达CAR分子作为一种新型抗肿瘤疗法的有效性尚有待进一步验证。
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