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目的:膀胱癌（Bladder Cancer,BLCA）全球发病率居恶性肿瘤的第九位,到2020年,大约有573,000例新病例和213,000例死亡病例,死亡率较高。在中国,BLCA占泌尿生殖系肿瘤发病率的第一位。目前,虽然BLCA可经过传统的手术切除、化疗以及免疫治疗,但BLCA治疗效果并不理想,其复发率和死亡率并无明显改善。目前对于BLCA的治疗尚无任何明确的靶向因子,因此寻找BLCA分子标志物和治疗靶点迫在眉睫。作为Hippo信号通路中关键组分,大肿瘤抑制因子1（Large Tumor Suppressor,LATS1）是一种保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,具有抑制细胞增殖和器官大小的功能。以往研究表明LATS1主要发挥抑制肿瘤的功能,但近些年研究发现LATS1在不同肿瘤中具有相反作用。细胞焦亡是一种由炎性小体激活的炎症性细胞程序性死亡。炎性小体是由模式识别受体（PRR）通过斑点样蛋白（ASC）间接连接pro-Caspase-1形成的一个高分子复合物。组成炎性小体的PRR主要包括NOD样受体（NOD-like receptor,NLR）蛋白家族的NLRP1、NLRP3、NLRC4和黑素瘤缺乏因子2（AIM2）等。炎性小体激活Caspase-1,将pro-IL-1β和pro-IL-18剪切成成熟形式,并切割焦亡执行蛋白Gasdermin D形成C端（GSDMD-C）和N端（GSDMD-N）两个片段,诱发细胞焦亡。细胞焦亡与多种肿瘤的发生密切相关,在不同的肿瘤中细胞焦亡可发挥不同的功能。有研究表明,细胞焦亡可促进肺腺癌细胞A549的增殖,但却可抑制肝癌细胞的生长。因此,细胞焦亡在肿瘤的发生发展过程中可能是一把“双刃剑”。TNF-α作为调节细胞凋亡、炎症和免疫的关键因子,对局部和全身炎症十分重要。有研究表明,肿瘤坏死因子TNF-α和IFN-γ共同作用下可引起骨髓源性巨噬细胞的细胞焦亡。TNF-α是已知的NF-κB通路激活因子之一,NF-κB通路的激活可增强NLRP3的表达,从而诱导宫颈癌、黑色素瘤、结直肠癌和鼻咽癌等细胞焦亡;在宫颈癌细胞中,SIRT1缺失激活NF-κB/p65上调AIM2表达诱导细胞焦亡,从而抑制细胞增殖。目前,TNF-α/NF-κB通路与细胞焦亡在膀胱癌发生发展过程中尚未见报道。目前,LATS1在BLCA的发生发展过程中作用尚不明确。我们通过TCGA数据库分析发现LATS1高表达的BLCA患者预后不良。因此我们以LATS1为切入点,研究LATS1在BLCA中可能发挥的作用及机制,为治疗BLCA提供新的分子靶点。研究方法:1、我们采用siRNA沉默BLCA中5637和Biu-87细胞LATS1表达（si-LATS1）。2、RT-qPCR和Western Blot法验证si-LATS1对5637和Biu-87细胞LATS1表达的影响。3、CCK-8法、克隆形成实验分别检测si-LATS1对5637和Biu-87细胞的细胞活力及增殖能力。4、流式细胞术检测si-LATS1对5637和Biu-87细胞的细胞凋亡和细胞周期的影响。5、Bulk RNA-Seq分析BLCA中si-LATS1的基因表达差异及基因功能富集。6、Western Blot检测si-LATS1对5637和Biu-87细胞TNF-α/NFκB信号通路相关蛋白以及炎症相关蛋白Caspase-1、TNF-α、IL-1β、IL-18、p-NF-κB/p65、NF-κB、GSDMD、NLRP3、NLRC4、AIM2的表达情况。7、免疫荧光检测si-LATS1对NF-κB细胞内定位影响。8、试剂盒检测si-LATS1组5637和Biu-87细胞Caspase-1和Caspase-4活性、乳酸脱氢酶（LDH）的释放。9、DNA ladder试剂盒检测si-LATS1组细胞DNA损伤情况。10、CCK-8法检测NF-κB抑制剂PS-341对si-LATS1组细胞活力的影响。11、Western Blot法检测PS-341对si-LATS1组细胞炎症相关蛋白表达的影响。12、Western Blot法检测高表达LATS1（OE-LATS1）对5637和Biu-87细胞TNF-α/NFκB信号通路相关蛋白以及炎症相关蛋白Caspase-1、TNF-α、IL-1β、IL-18、p-NF-κB/p65、NF-κB1、NF-κB、GSDMD、NLRP3、NLRC4、AIM2表达的影响。13、裸鼠皮下成瘤实验验证si-LATS1对肿瘤细胞生长的影响。结果:与对照组（NC）相比,si-LATS1组5637和Biu-87细胞的细胞活力显著降低;si-LATS1组5637和Biu-87细胞的细胞凋亡和细胞周期并无明显变化;si-LATS1组5637和Biu-87细胞中TNF-α、p-NFκB/p65、NF-κB1、NLRP3、NLRC4、AIM2的表达显著增高;si-LATS1组NF-κB入核显著增强;si-LATS1组细胞中Caspase-1活性增强、IL-1β、IL-18和GSDMD剪切体表达增加;OE-LATS1抑制5637和Biu-87细胞中TNF-α、p-NF-κB/p65、NLRP3、NLRC4、AIM2的表达,IL-1β、IL-18和GSDMD剪切体表达显著降低。结论:在5637和Biu-87细胞中,LATS1缺失通过激活TNF-α/NF-κB信号通路促进NLRP3、NLRC4和AIM2炎性小体的形成,进而激活Caspase-1剪切GSDMD诱发细胞焦亡。因此,LATS1可作为BLCA治疗的潜在靶点。