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目的再生障碍性贫血（Aplastic anemia,AA）简称再障,是由多种病因导致的骨髓衰竭性疾病,表现为骨髓增生低下、全血细胞减少,临床以贫血、出血和感染为主要表现。目前,AA的发病原因尚不明确,可能与物理射线、化学药物、病毒及遗传因素有关。AA的发病机制复杂,主要涉及造血干/祖细胞缺陷、免疫异常和造血微环境的破坏。AA的发病率呈双峰分布曲线,其中一个峰值出现在1525岁之间,第二个峰值出现在60岁以上,男女发病率无明显差别。临床治疗主要有造血干细胞移植治疗和免疫抑制治疗两种方法,但二者均具有其缺点和局限性。因此,寻找更为安全有效的治疗方法仍是目前研究的热点。低强度脉冲超声（Low intensity pulsed ultrasound,LIPUS）是以空化效应和机械效应为主的一种超声波。前期实验表明LIPUS治疗显著促进化疗所致骨髓抑制动物骨髓有核细胞增殖,增加外周血白细胞、免疫球蛋白数量,降低腹泻率和死亡率;并且LIPUS通过降低CD34阳性细胞表面黏附分子的表达,促进造血细胞向外周血的迁移;通过降低PU.1的表达,促进HSCs向粒细胞和淋巴细胞的分化。本研究旨在构建苯和环磷酰胺所致的新西兰兔AA动物模型,探索LIPUS治疗AA的有效性及作用机制。方法1.采用苯和环磷酰胺联合建立AA动物模型:苯1.0 ml/kg,注射8次,环磷酰胺15 mg/kg,注射3次,这为一个给药周期,共给药3个周期。建立骨髓增生减低、三系血细胞减少的新西兰兔AA模型。2.16只AA模型兔随机分为对照组和LIPUS组,每组8只。LIPUS组每日于一侧股骨干骺端进行1次超声辐照（0.2 W/cm2,0.6 MHz,20min）,持续30天。对照组接受假辐照。观察新西兰兔的一般情况,血常规检测外周血血细胞计数,骨髓组织病理切片观察骨髓增殖情况,ELISA检测外周血免疫相关分子的变化。3.细胞实验分为4组,BMSC组:BMSCs单独培养;BMSC+Th17组:首先将BMSCs接种于六孔板,待其铺满后加入Th17细胞;BMSC+Th17+LIPUS组:首先将BMSCs接种于六孔板,待其铺满后加入Th17细胞,共培养的细胞过夜后进行1次LIPUS辐照（30mW/cm2,0.6 MHz,20min）;Th17组:Th17细胞单独培养。四组细胞同时进行种板及样本收集。ELISA检测培养液上清中IL-6、IL-17A和IL-17F的水平;RT-PCR及WB检测Th17细胞STAT3的表达水平。结果1.32只新西兰兔给药前WBCs、RBCs、PLTs和HGB计数分别为:15.13±5.12×109/L、8.82±0.58×1012/L、234±107×109/L和311±20g/L,给药结束后分别为:5.55±5.55×109/L、7.06±0.54×1012/L、167±35×109/L和251±14g/L。模型兔WBCs、RBCs、PLTs和HGB计数分别下降63.3%、20.0%、28.6%和19.3%,且与正常兔相比差异均有统计学意义（P<0.05）。正常新西兰兔骨髓造血组织丰富,细胞增殖活跃;模型兔骨髓组织的正常结构被破坏,造血组织减少,脂肪组织增加,骨髓小粒空虚,造血细胞减少。2.模型兔出现活动减少、反应迟钝、食物和水摄入量减少、脱发等症状,LIPUS辐照后这些症状有所改善。LIPUS组死亡1只（12.5%）,对照组死亡2只（25%）,两组死亡率无统计学差异（P>0.05）。实验第151天时:LIPUS组WBCs、RBCs、PLTs和HGB计数分别是11.53±6.38×109/L、10.12±0.83×1012/L、239±32×109/L和253±11g/L;对照组WBCs、RBCs、PLTs和HGB计数分别是9.23±3.70×109/L、8.56±0.60×1012/L、149±32×109/L和224±13g/L;两组RBCs、PLTs和HGB计数有统计学差异（P<0.05）。与实验第93天时相比,实验第123天时,对照组骨髓有核细胞计数无明显改变（P>0.05）,而LIPUS组则显著升高,甚至超过了正常兔（P<0.05）。LIPUS治疗后,血清FOXP3水平升高,IL-17水平却明显下降,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。LIPUS治疗后,LIPUS组和对照组血清IL-4和IFN-γ水平的变化趋势相同,差异无统计学意义（P>0.05）。3.LIPUS辐照后0.5小时,Th17细胞STAT3蛋白表达水平最低,是LIPUS抑制作用表现最明显的时刻,此时采集标本最佳。WB和PCR检测表明:BMSCs可抑制Th17细胞STAT3基因的表达,并且LIPUS可直接或通过BMSCs间接抑制Th17细胞STAT3基因的表达。ELISA检测表明:Th17细胞可抑制BMSCs分泌IL-6,LIPUS可直接或通过Th17细胞间接抑制BMSCs分泌IL-6。结论1.调整后的给药方法可建立骨髓增生减低、外周血三系细胞减少的新西兰兔AA动物模型。2.LIPUS不仅可升高外周血WBCs、RBCs、PLTs和HGB的数量,促进骨髓有核细胞的增殖,改善骨髓脂肪化的状态;还可以调节外周血免疫分子的水平,纠正免疫分子的异常。3.LIPUS可直接或通过减少BMSCs分泌IL-6间接抑制Th17细胞分泌IL-17,进而改善模型兔FOXP3/IL-17比例失衡状态。