【摘 要】
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禽白血病病毒J亚群（Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J）是一种禽致瘤逆转录病毒,可在肉鸡和蛋鸡中诱导骨髓细胞瘤和各种其他肿瘤,该病毒一直在我国鸡群中广为流行,对我国的家禽养殖业造成巨大的经济损失。巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）是一种具有多种生物活性的细胞因子,它不仅可以抑制巨噬细胞的迁移并直接或间接参与免疫反应以及增强细胞增殖和活力,还参与多种病原微生物感染
【基金项目】
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国家自然科学基金（项目编号:32072816）； 山东省重点研发计划（重大科技创新工程）项目（项目编号:2019JZZY010735）； 国家自然科学基金青年项目（项目编号:31902233）；
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禽白血病病毒J亚群（Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J）是一种禽致瘤逆转录病毒,可在肉鸡和蛋鸡中诱导骨髓细胞瘤和各种其他肿瘤,该病毒一直在我国鸡群中广为流行,对我国的家禽养殖业造成巨大的经济损失。巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）是一种具有多种生物活性的细胞因子,它不仅可以抑制巨噬细胞的迁移并直接或间接参与免疫反应以及增强细胞增殖和活力,还参与多种病原微生物感染的发病机制。近年来越来越多的研究证明了ALV-J可以在其感染的过程中劫持宿主因子增强其感染能力,然而,MIF在该过程中的具体作用尚不清楚。本研究发现ALV-J在感染前期能够激活宿主细胞中MIF表达,而MIF参与多种病原微生物的发病机制,这表明MIF可能参与ALV-J感染宿主细胞的过程。为了明确MIF的表达和ALV-J感染的关系,本研究构建了MIF的真核表达质粒和靶向MIF的干扰质粒,通过过表达和干扰MIF,发现ALV-J的m RNA和蛋白水平相应的显著上升和下降,证明了MIF能够促进ALV-J的复制。通过病毒的吸附和内化实验证明了MIF是在ALV-J感染的内化而非吸附阶段发挥作用的。进一步,又通过MIF的特异性拮抗剂ISO-1证明了MIF参与ALV-J感染过程是发生在细胞质中,且MIF是通过其作为酶的活性来参与ALV-J复制。随后,为明确MIF是否通过与ALV-J结构蛋白互作促进其感染,构建了编码ALV-J结构蛋白Gag,Pol,Env的真核表达质粒,通过激光共聚焦和免疫共沉淀技术检测与MIF互作的ALV-J结构蛋白,发现MIF与ALV-J Gag蛋白在细胞质中发生互作。为进一步明确与MIF互作的Gag亚单位蛋白,构建了编码Gag蛋白的六个亚单位蛋白的真核表达质粒,其中包括编码基质蛋白p19（MA）、衣壳蛋白p27（CA）、核衣壳蛋白p12（NC）、酶蛋白p15,还有两个功能未知的小肽p2和p10的真核表达质粒,通过激光共聚焦和免疫共沉淀技术检测到与MIF互作的Gag亚单位蛋白是p10和p27且该过程发生在细胞质中。总之,这些结果表明ALV-J Gag蛋白中的亚单位蛋白p10和p27可以与MIF互作,从而促进ALV-J复制。本研究首次揭示了ALV-J Gag的亚单位蛋白p10/p27和宿主因子MIF在ALV-J感染中的作用,揭示了ALV-J通过其自身结构蛋白招募宿主因子促进其复制的新机制,为深入了解ALV-J及逆转录病毒的致病机制提供新的理论支撑。
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