【摘 要】
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甜菊是一种新型的糖源作物,因其叶片细胞内可合成多种高甜度、低热量、无毒性、性质稳定的甜菊糖苷而日益受到重视.由于甜菊糖苷的积累与UDPG:甜菊糖苷葡萄糖基转移酶直接相
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甜菊是一种新型的糖源作物,因其叶片细胞内可合成多种高甜度、低热量、无毒性、性质稳定的甜菊糖苷而日益受到重视.由于甜菊糖苷的积累与UDPG:甜菊糖苷葡萄糖基转移酶直接相关,因此,增加UDPG:甜菊糖苷糖基转移酶基的表达量将有助于增加糖苷的产量及改善商品糖苷的口味.为克隆UDPG:甜菊糖苷糖基转移酶cDNA,该文以λ噬菌体gt10为载体,构建了甜菊叶片非表达cDNA文库.根据与植物次生产物糖基化有关的UDPG:葡萄糖基转移酶的特征怀保守序列,设计了引物gt1:5′GTC ACA CAT TGT GGA TGG AA3′和gt2:5′GGT ACC GTT GAT TTG CAG GCC 3′.从该文库中提取重组的λgt10DNA作为模板,以λgt10载体多克隆位点附近的反向通用引物分别与gt1和gt2配合,经两次PCR反应,扩增出517bp和377bp两条片段(GT1和GT2).从插入bak基因片段的pBAK质粒出发,将插入的BAK片段去除,空载体pCRII质粒经T4 DNA连接酶重新环化,EcoRV平端酶切,及3′末端加T后改造成一个可克隆PCR产物的T载体.
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