益生菌作为安全、有效的微生态制剂,可显著提升养殖动物的免疫能力,越来越受到水产养殖行业重视。乳酸菌（Lactic acid bacteria,LAB）作为安全的食品级益生菌,在人类食品和陆生养殖行业中已有颇多研究。但由于陆生动物肠道环境与肠道土著菌群和水产动物有着较大差异,陆生动物源的乳酸菌对鱼类发挥的益生效果良莠不齐。故本研究选择从健康鲤（Cyprinus Carpio L.）的肠道中分离出具有免疫活性的鱼源乳酸菌并探究其,及其代谢产物和不同处理方式对鲤的益生作用。研究主要包括:1.鱼源免疫活性乳酸菌的筛选与鉴定通过体外免疫活性;消化道环境（p H 2.5和胆盐浓度0.1%～0.5%）存活率;对嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）以及大肠杆菌（Escherichia coli）等病原菌的抑菌能力;粘附能力以及抑制病原菌粘附能力的检测,编号Z-2菌株的离体益生能力最强。再通过对其进行形态学鉴定及系统发育树构建,鉴定为乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）,命名为Lactococcus lactis Z-2。经抗生素敏感性实验和动物安全性实验,发现其对诺氟沙星、环丙沙星、庆大霉素、氯霉素、丁胺卡那和红霉素以及青霉素等9种抗生素敏感,且未见其对鲤的负面作用。故Lactococcus lactis Z-2为本部分实验筛选出的理想乳酸菌菌株,用于后续实验。2.Lactococcus lactis Z-2对鲤最适添加浓度的探究实验设置对照组（CK）和10~7（实验组A）、10~8（实验组B）、10~9（实验组C）CFU/g L.lactis Z-2添加组,每组三个平行（n=20）,养殖8周。实验结束后对鲤生长指标、血清免疫指标、肝胰腺抗氧化指标、肠道形态学指标及肌肉常规组分进行检测;再对阴性对照组（CK-）实验鱼腹腔注射200μL的无菌PBS,阳性对照组（CK+）和各个实验组腹腔注射嗜水气单胞菌200μL,浓度为1×10~8 CFU/m L。攻毒24 h后,统计各处理组的存活率,检测被感染鱼的血清免疫指标和肝胰腺抗氧化指标。实验结果显示:（1）L.lactis Z-2可显著提升鲤的末体重、增重率、特定生长率等生长相关指标,并显著降低饲料转化率和肥满度（P＜0.05）,且实验组B效果最为显著;对脏体比和存活率无显著性影响（P＞0.05）。（2）L.lactis Z-2可显著提升鲤肝胰腺的总抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽（GSH）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化氢酶（GSH-Px）、溶菌酶（LZM）、碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）等的酶活力（P＜0.05）,并显著降低鲤肝胰腺丙二醛（MDA）的含量（P＜0.05）,其中实验组B效果最佳;攻毒实验中,各组CAT、LZM、GSH-Px、ACP、AKP、MDA相对于CK-均有升高,实验组B+最为接近CK-,并显著低于CK+（P＜0.05）。（3）L.lactis Z-2可显著提升鲤血清细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、TGF-β）的表达量,在实验组B达到最高值,并显著高于其它组（P＜0.05）;攻毒实验中,相对于CK+,实验组B+有着显著降低细胞因子表达量的作用（P＜0.05）,使之更为接近CK-。（4）L.lactis Z-2可显著提升鲤肠道淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶的活性及肌肉的粗蛋白含量（P＜0.05）;并降低肌肉粗灰分、粗脂肪和水分含量（P＜0.05）;且实验组B可显著提升鲤肠道肌层厚度与前肠绒毛长度（P＜0.05）。上述结果表明:L.lactis Z-2可在鲤生长性能、免疫能力、抗氧化能力、抗致病菌能力、肠道消化能力及肉质组成等多方面产生有益影响,且最适添加浓度为1×10~8CFU/g。3.Lactococcus lactis Z-2胞外多糖对鲤益生作用的研究益生菌胞外多糖（Exopolysaccharides,EPS）可以提高鱼的免疫应答水平,是待开发的新型免疫增强剂。已证明L.lactis Z-2的益生作用,但其胞外多糖（EPS-2）对鲤的免疫调节、抗氧化作用和抗病能力尚不清楚。为此,对EPS-2的组成进行分析,发现其由鼠李糖、木糖、甘露糖、葡萄糖以及半乳糖组成,其摩尔组成百分比分别是13.3%、14.1%、18.5%、27.4%和26.7%。再用不同浓度的EPS-2对鲤进行离体免疫器官细胞孵育及体内灌喂处理。实验结果显示,不同浓度EPS-2（250、500、1000μg/m L）可显著增强鲤头肾细胞的增殖能力和头肾细胞的吞噬活性,并能显著诱导NO和细胞因子的合成（P＜0.05）。体内实验设置阴性对照组（CK-,灌喂无菌PBS）和阳性对照组（CK+,灌喂无菌PBS）及3种不同浓度的EPS-2处理组,每天灌喂1次,灌喂期间正常饲喂。灌喂7天后,CK-组腹腔注射无菌PBS,CK+和三个EPS-2处理组腹腔注射嗜水气单胞菌（浓度、剂量同上一章）,而后检测血清免疫指标及肝胰腺抗氧化指标。结果显示,在感染嗜水气单胞菌之前,与阴性对照组相比,实验组显著上调血清NO、细胞因子的表达水平、LZM和AKP活性和肝胰腺的抗氧化能力,下调肝胰腺MDA活性（P＜0.05）。攻毒后各实验组血清NO、细胞因子、LZM和AKP活性显著低于CK+（P＜0.05）。上述结果表明:EPS-2可对鲤发挥免疫调节和抗氧化作用,用以鲤的增强免疫力和抗病力。4.Lactococcus lactis Z-2不同处理方式对鲤益生作用的研究为探究L.lactis Z-2不同处理方式的益生作用,实验设置6种处理方式:活菌及上清液的混合物（LCS）、无细菌培养上清液（CS）、活菌（LC）、菌热灭活（HK）、菌超声破碎（UB）和EPS-2与鲤头肾细胞进行体外培养,检测其对鲤头肾的增殖能力和吞噬活性的影响,以及孵育液中NO和免疫相关细胞因子的表达量。结果显示:EPS-2、LCS、LC和UB处理组均能显著增强头肾细胞的增殖能力和头肾细胞的吞噬活性,并提高孵育液中NO的合成量（P＜0.05）;所有处理组均能显著增加头肾细胞孵育液中细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6和TGF-β）的合成量（P＜0.05）;而仅有LCS、CS和EPS-2处理组能显著提升IL-10的合成量（P＜0.05）。上述结果表明:L.lactis Z-2的不同处理方式均对鲤表现出一定的离体免疫调节作用。