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第一节 CMT NPs的制备及表征、体内外安全性、靶向性研究目的制得具有碳材料光学特性及稳定磁性的CM纳米粒,成功包载tuftsin得到多功能纳米粒CMT,为进一步研究打下基础。方法用高温碳化、酸化及水化、机械搅拌的方法制备CMT纳米粒,通过电镜观察形态、分析粒径电位、红外光谱、测量磁饱和度、检测tuftsin包封率及载药率,光热转换能力评价CMT纳米粒的表征特点。通过检测细胞与纳米粒共孵育后的存活情况、体内注射纳米粒后的血液生化及切片评价纳米粒的体内外安全性。通过观测纳米粒在磁场作用下Y79细胞的摄取率,以及在荷瘤裸鼠体内的分布情况,评价纳米粒的体内外磁靶向能力。结果扫描电镜下观察到CMT纳米粒具有较为均一的形态及良好的分散性,粒径为303.1±48.53 nm,zeta电位为-12.1±2.88 mV,磁饱和结果显示CMT的磁饱和强度为92.84emu/g。傅里叶红外光谱图显示药物tuftsin成功包载于CMT纳米粒中。Tufsin的包封率为29±4.09%,载药率为2.64±0.37%。经过激光辐照后,CMT纳米粒混悬液温度可达57.5℃。ARPE-19细胞和Y79细胞分别与纳米粒共孵育后,细胞存活率均大于90%。裸鼠注射CMT纳米粒后,血常规及血液生化未见明显异常。体内外靶向研究发现CMT纳米粒具有良好的磁靶向性,体内注射CMT纳米粒后,在4h时肿瘤内部纳米粒蓄积达到最大值。结论成功制备出大小均一、稳定性良好的多功能载药碳化纳米粒。该纳米粒,具有良好的光热转换能力,是光热治疗的理想材料。此外还具有良好的体内外安全性、靶向性,是一种安全、拥有磁靶向性质、具有光热转换能力的多功能纳米粒。第二节 CMT NPs的体内外双模态成像研究目的探究CMT纳米粒的体内外光声、核磁共振双模态成像能力,为应用于RB诊疗提供基础。方法通过光声成像仪对6组样本[CMT NPs(100、200、400、800ug/ml)、CMNPs(800ug/ml)、生理盐水组]进行体外光声成像。通过核磁共振扫描仪对7组样本[CMTNPs(5、10、20、40、80ug/ml)、CMNPs(80ug/ml)、生理盐水组]进行体外核磁共振成像。此外,将15只RB皮下荷瘤裸小鼠随机分为3组:CMTNPs(800ug/ml),CM NPs(800ug/ml)和生理盐水组,尾静脉注射各组纳米粒或生理盐水后,在不同时间点,使用光声成像仪和磁共振扫描仪对肿瘤部位进行扫描,并记录分析图像及数据结果。结果(1)光声成像:体外研究中,光声信号随CMT NPs的浓度增加而增加,CM NPs组与CMT NPs组信号比较没有统计学差异,生理盐水组无光声信号。体内研究中,裸小鼠静尾静脉注射CMT NPs和CM NPs 1h后光声信号逐渐增强,4h达到高峰,后逐渐降低,24h时仍有光声信号,生理盐水组无光声信号;(2)磁共振成像:体外研究中,T2加权核磁信号随CMT NPs的浓度增加而降低,CM NPs组与CMT NPs组信号比较没有统计学差异,生理盐水组高信号。体内研究中,裸小鼠静尾静脉注射CMT NPs和CM NPs 1h后T2加权核磁信号逐渐降低,4h达到最低,生理盐水组持续高信号。结论CMT纳米粒展现出优良的光声、磁共振成像特性,对RB的诊断提供了应用价值。第三节 激光联合CMT纳米粒光热/免疫治疗视网膜母细胞瘤的研究目的探究激光联合CMT纳米粒杀伤肿瘤及激活免疫的能力,评价该纳米粒系统光热联合免疫治疗的有效性,为RB的治疗应用提供依据。方法通过检测6组[对照组、tuftsin、CMT NPs、激光、激光+CM NPs、激光+CMTNPs]处理后的Y79细胞凋亡情况;各组体内治疗RB皮下种植瘤后,观察肿瘤细胞形态,检测凋亡指数、增殖指数,评价激光联合CMT纳米粒体内外杀伤视网膜母细胞瘤细胞的有效性。通过检测各组处理后的Ana-1巨噬细胞表达CD16/32、CD206情况,体内治疗后检测肿瘤组织CD86的表达量和TNF-α的含量,评价激光联合组CMT纳米粒体内外激活巨噬细胞免疫的能力。结果体外研究中,发现激光联合CM纳米粒和激光联合CMT纳米粒处理后Y79细胞凋亡率更高。体内研究中,各组治疗RB皮下种植瘤后,激光联合CMT组肿瘤体积逐渐减小,切片下观察到肿瘤细胞肿胀伴大量核破碎,坏死明显。与其他组比较,肿瘤细胞增值指数最低,凋亡指数最高。此外,Ana-1巨噬细胞经过各组处理后,各组CD206阳性细胞均低,激光联合CMT纳米粒组处理后CD16/32阳性细胞比例高于其他组。体内治疗后,激光联合CMT纳米粒组处理后,肿瘤组织CD86表达及TNF-α含量高于其他组。结论CMT NPs增强激光治疗疗效,可实现双模态引导下激光治疗RB,抑制肿瘤的生长,取得良好的治疗效果。