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目的:
宫颈癌是全球危害女性健康的第二位肿瘤,其发生可从低级别上皮内病变到高级别上皮内病变。人乳头瘤病毒感染被认为是宫颈癌发生的最主要因素,然而仅有一少部分感染患者发展为宫颈癌,这意味着仍有其它因素参与宫颈癌的发生。血管生成是肿瘤增生、侵袭和转移的基本过程,血管内皮生长因子(VEGF)起着决定性的作用,而且越来越多的证据表明HPV癌蛋白也可以促进肿瘤的血管生成和VEGF的表达。
本研究的主要目的是评价肿瘤标志物VEGFmRNA和EndostatinmRNA在宫颈癌及上皮内病变液基细胞中的诊断价值,并与细胞学和组织学诊断结果进行对比研究。
方法:
收集中国医科大学附属第一医院2010年12月至2011年6月门诊及住院患者98例,其中:无上皮内病变或恶性病变者30例,非典型鳞状上皮细胞意义不明确者4例,非典型鳞状上皮细胞不除外高级别鳞状上皮内病变者27例,低级别鳞状上皮内病变24例,高级别鳞状上皮内病变38例,鳞状细胞癌5例。所有病例均有组织病理学诊断结果。另随机选取健康体检者30例作为阴性对照。128例受试者年龄为21-80岁,平均45.3岁。
1、液基细胞薄片的制备和判读
收集的液基细胞标本经梯度离心,收集有效细胞成分,经全自动细胞制片仪制片和染色,由2名细胞学专家盲法判读,余下标本用于RNA提取。
2、逆转录多聚酶链式反应(Reveresetranscriptionpolymerasechainreaction,RT-PCR)扩增及扩增产物的分析
(1)收集宫颈细胞标本提取总RNA。
(2)总RNA的反转录及VEGF和endostatin基因片段的扩增。
(3)8%聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染色观察并分析结果。
结果:
1、VEGF-mRNA和Endostatin-mRNA在鳞癌中的表达水平明显高于重度不典型增生(CINⅢ)或中度不典型增生(CINⅡ)中的表达水平(P<0.05);在重度不典型增生(CINⅢ)或中度不典型增生(CINⅡ)中的表达水平明显高于轻度不典型增生(CINⅠ)中的表达水平(P<0.05);在轻度不典型增生(CINⅠ)中的表达水平明显高于炎症或对照组中的表达水平(P<0.01)。
2、有14例宫颈癌病变细胞学呈假阴性结果,分别为9例高级别病变(HSIL),1例低级别病变(LSIL),3例ASC-H及1例NILM,而VEGF-mRNA均呈阳性表达。
3、有43例癌前期病变VEGF-mRNA也呈阳性表达,它们分别是18例CINⅢ,14例CINⅡ及11例CINⅠ。
结论:
应用RT-PCR方法检测VEGF-mRNA和endostatin-mRNA可能是细胞学诊断的一个重要辅助手段,尤其在高危人群中对宫颈癌的早期诊断和宫颈癌前期病变的鉴别具有重要的临床应用价值。