新疆藁本中酪氨酸酶抑制成分的高效液相色谱筛选研究

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新疆藁本(Coniselium vaginatium Thell其异名Coniselium tataricum Hoffm.)为伞形科(Umbelliferae)山穹(Coniselium)属植物。酪氨酸酶广泛存在生物体内,是黑色素细胞分化成熟的标志,同时也决定着黑素合成的速率,而酪氨酸酶抑制剂可以有效的抑制酪氨酸酶活性,在农业、食品保鲜、医药和化妆品等领域中有着较好应用前景。从植物组织中提取的对酪氨酸酶有抑制作用的天然活性物质与传统的化学物质相比具有纯天然、无污染、来源丰富等优点,是目前研究的热点。本试验筛选了新疆藁本、罗布麻、肉苁蓉、红花、甘草等新疆种特色植物,选出对酪氨酸酶抑制作用最好的植物新疆藁本并对其萃取相进行筛选研究,选出效果较好的进行高效液相色谱仪柱后流出物进行对酪氨酸酶影响的筛选和在线抗氧化研究,主要研究结果介绍如下:1.对新疆藁本的根茎部分、光果甘草的根部、红花的花、罗布麻的茎叶部分、肉苁蓉的根部的75%乙醇提取物进行了对酪氨酸酶作用的筛选,对酪氨酸酶的抑制率依次为74.3%、74.1%、38.5%、27.7%、16.8%。2.采用水蒸气蒸馏法和顶空固相微萃取(Head-space solid-phase microextractions HS-SPME)结合气质联用分析,从新疆藁本中鉴定出22个主要成分,主要为肉豆蔻醚(75.88%)、乙酸松油酯(9.4%)、香松烯(2.99%)、榄香素(2.76%)、石竹烯(1.29%)等。水蒸气蒸馏法初步鉴定出13个成分,主要为肉豆蔻醚(87.3%)、乙酸松油酯(3.29%)、α-水芹烯(2.56%)、6-丁基-1,4-环庚二烯(2.48%)、3-蒈烯(1.15%)。3.对五种新疆特色植物不同浓度的粗提物的及新疆藁本的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水四个萃取相的活性进行了筛选,其中石油醚萃取相和乙酸乙酯萃取相对酪氨酸酶的抑制效果较突出。4.对新疆藁本石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水四个萃取相的高效液相色谱柱后流出物进行对酪酸酸酶活性抑制筛选和在线DPPH抗氧化筛选。其中对酪氨酸酶活性的抑制筛选中石油醚萃取相效果最好。采用硅胶层析法从新疆藁本石油醚萃取相分离出酪氨酸酶抑制成分肉豆蔻醚,并对其进行了鉴定。5.采用酪氨酸酶多巴速率氧化法研究肉豆蔻醚对酪氨酸酶的抑制作用,其中对酪氨酸酶二酚酶的IC50为33.41μl/mL;对酪氨酸酶单酚酶的IC50为139.28μl/mL。对酪氨酸酶二酚酶的抑制属于可逆抑制作用。
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