【摘 要】
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内皮抑素(endostatin)是XVIII型胶原C-末端183个氨其酸残基片段,是1997年发出对血管发生和肿瘤生长有专一性抑制作用的20kD的蛋白质.在动物实验中,具良好的抑瘤效果,并且无毒
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内皮抑素(endostatin)是XVIII型胶原C-末端183个氨其酸残基片段,是1997年发出对血管发生和肿瘤生长有专一性抑制作用的20kD的蛋白质.在动物实验中,具良好的抑瘤效果,并且无毒副作用,不产生耐药性.除此之外,内皮抑素还可阻断动脉粥样硬化的形成.该文以RT-PCR技术为基础,构建了人内皮抑素的克隆质粒和重组表达质粒.该实验首先从中国汉族成年人正常肝组织中撮总RNA,利用人工合成的XVIII型胶原的特异引物,反转录XVIII 型胶原的mRNA,获得XVIII型胶有的cDNA.再用人工合成特异的人内皮抑素引物从其中扩增 出568bp(含引入的限制性酶切位点)的人内皮抑素cDNA.通过TaqDNA聚合酶在PCR片段3末端加单个A的作用,将内皮抑素基因片段快捷克隆入PUCm-T载体,成功构建了含人内皮抑 素cDNA的克隆持粒PUC-ES.用DNA测序仪测定质粒中的插入序列,证实为XVIII型胶原C-末端552bp的内皮抑素基因,将其亚克隆入PTTQ-18及PGEMX-2表达质粒,成功构建PTTQ-ES及PGENEX-ES表达质粒.PGEMEX-ES表达质粒在IPTG诱导下表达约50KD的T7gene10内皮抑制融合蛋白.该文还通过PCR克隆构建了PKPL-ES表达质粒,PKPL-ES在42℃诱导下表达约20KD的内皮抑 素.PGENEX-ES、PKPL-ES表达产物的量和分子量与预期基本一致,PTTQ-ES没有表达可见的 目的产物.
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