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第一部分分离鉴定SD鼠表皮干细胞目的对SD大鼠表皮干细胞进行分离培养,并对所培养表皮干细胞形态,细胞表面标志物进行检测,以确保所培养的细胞群为富集了表皮干细胞的细胞群。方法利用胰酶消化法分离大鼠表皮干细胞,Ⅳ型胶原差速贴壁法进行筛选,克隆实验来鉴定细胞增殖能力,免疫荧光共染角蛋白19及β1整合素,联合阴性标记物角蛋白10,进行表型鉴定。结果倒置相差显微镜所得细胞形态多呈类圆形、体积小、核大,增殖后期可见马路石样结构。荧光检测结果表明所细胞β1整合素及角蛋白19共表达,阴性标记物角蛋白10无明显表达。克隆形成实验显示所分离的细胞有较强的增殖能力。结论成功建立了获得表皮干细胞体外分离的方法第二部分SD鼠离体表皮干细胞热损伤模型建立目的体外建立SD鼠ESCs热损伤模型,研究皮肤烧伤后ESCs生物学变化。方法体外培养大鼠表皮干细胞,实验组细胞在水浴锅中分别以51、52、53、54℃孵育30s,对照组细胞37℃孵育30s,每组重复3次。用流式细胞仪对细胞存活率进行定量分析,热损伤后干细胞内HSP70蛋白表达量的变化通过免疫印迹试验检测,使用实时荧光定量PCR法检测HSP70mRNA的变化。结果随着热损伤温度的升高,表皮干细胞中凋亡和死亡细胞逐渐增加,细胞存活率逐渐下降;52℃时表皮干细胞存活率为85.2%,53℃时为83.7%,54℃存活率为53.2%。Western blot检测结果显示随温度升高HSP70表达量升高,53℃达到高峰,54℃时表达量开始下降当仍比对照组高。RTqPCR检测结果显示HSP70mRNA表达量在一定范围内随温度升高而增加,以53℃的HSP70mRNA表达量最为显著(P<0.05),而在54℃,55℃时表达量急剧下降并且与对照组相比显著降低。结论热损伤能造成离体大鼠表皮干细胞凋亡,HSP70表达量在一定温度范围内增高并为细胞提供保护作用,53℃孵育30s为构建表皮干细胞热损伤模型的较好条件。该模型可为后继有关实验提供良好的研究平台。