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锌指蛋白(zinc finger protein,ZNF)是真核生物中分布最为广泛的一类转录因子,与细胞增殖分化、生物体生长发育以及某些疾病的发生发展密切相关。生物体通过选择性剪切使得一个基因可以产生多个转录本,极大的丰富了基因组的多样性和复杂性,不同转录本表达功能不同的蛋白质,并互相协调,满足生物体在不同生长发育阶段的更高需求,可视为生物进化的一个重要途径。ZNF280D基因普遍存在与自然界的多种生物中,不同物种该基因出现的剪接体结构和数量各不相同。ZNF280D基因作为锌指家族的一个成员,对生物体生长发育具有重要的潜在调节功能。本试验旨在探究马身猪和大白猪中ZNF280D基因的剪接体类型,以及它们在不同猪种各器官组织中的表达特点和肌肉中的发育性表达规律。在猪转录组测序中ZNF280D基因选择性剪切预测位点的基础上,采用PCR扩增及克隆技术对这些剪切位点进行了验证,获得了该基因的不同转录本序列结构并对其进行生物信息学分析。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术进一步检测了 ZNF280D不同转录本在3月龄马身猪和大白猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰脏、胃、小肠、小脑、腹脂和肌肉11种组织中的mRNA表达谱,以及两猪种0、3、6月龄时背最长肌、腰大肌、股二头肌三种肌肉(共18种组织)中ZNF280D基因各转录本的发育性表达规律。主要结果如下:(1)马身猪和大白猪的ZNF280D基因由于选择性剪切会产生两个转录本,分别定义为 ZNF280D1 和 ZNF280D2。ZNF280D1 为该基因的常规转录本,ZNF280D2第8外显子5’端大部分缺失,导致其所编码的多肽链比正常肽链少74个氨基酸,且氨基酸重新排列组合使其蛋白质中增加了一个C2H2型锌指结构域,由tC2H2型锌指蛋白变为maC2H2型锌指蛋白,但新增的锌指结构域不易结合DNA,能够增强相邻锌指结构与DNA的亲和力,提高结合产物的稳定性。(2)马身猪和大白猪大部分组织中ZNF280D2的相对表达量都显著或极显著的高于ZNF280D1(P<0.05;P<0.01),表明新型剪接体ZNF280D2发挥主要作用。猪胰脏(主要为 ZNF280D2)、胃和肌肉(ZNF280D1 和 ZNF280D2)中 ZNF280D mRNA 表达量显著高于其他组织(P<0.05)。ZNF280D2可能参与猪消化系统和肌肉的生长发育。另外,大白猪小脑中ZNF280D1表达量极显著高于ZNF280D2(P<0.01),且显著高于其他组织(P<0.05),说明ZNF280D1可能在小脑中也发挥一定的功能。(3)ZNF280D2在大白猪和马身猪背最长肌、腰大肌和股二头肌中的相对表达量随月龄增加均逐渐升高,ZNF280D1在大白猪肌肉组织中均逐渐降低,在马身猪中先降低后小幅度升高,但升高后ZNF280D1的表达量依然低于刚出生时的表达量。大部分肌肉组织中ZNF280D2的表达量都极显著的高于ZNF280D1(P<0.01),说明ZNF280D2在肌肉组织中发挥主要调控作用。ZNF280D基因两转录本表达量的变化趋势均不受肌肉类型的影响,ZNF280D1的变化趋势仅受猪种影响。说明猪ZNF280D基因的发育性表达规律与不同猪种的遗传背景有关。