【摘 要】
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研究目的:虽然华蟾素被广泛用于术后及放化疗后的辅助治疗,但其具体机制却不明确,本研究将探讨华蟾素对结肠癌转移的影响及内在机制,为结肠癌的转移治疗提供新的理论依据。研究方法:1.将华蟾素作用于HCT116、HCT8和SW620三种结肠癌细胞系,并通过CCK-8试剂检测其对结肠癌细胞存活率的影响,得到三种细胞的IC50;2.克隆形成实验观察华蟾素对细胞增殖的影响;3.划痕实验和Transwell小室迁
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研究目的:虽然华蟾素被广泛用于术后及放化疗后的辅助治疗,但其具体机制却不明确,本研究将探讨华蟾素对结肠癌转移的影响及内在机制,为结肠癌的转移治疗提供新的理论依据。研究方法:1.将华蟾素作用于HCT116、HCT8和SW620三种结肠癌细胞系,并通过CCK-8试剂检测其对结肠癌细胞存活率的影响,得到三种细胞的IC50;2.克隆形成实验观察华蟾素对细胞增殖的影响;3.划痕实验和Transwell小室迁移实验观察在华蟾素的作用下细胞的体外迁移能力变化;4.成功构建裸鼠PDX皮下瘤动物模型和裸鼠HCT116原位瘤模型,并分为对照组和实验组,华蟾素腹腔注射给药作为实验组,记录裸鼠的体重、瘤体大小和瘤体重量,实验结束后取出瘤体和裸鼠肝脏进行HE染色和免疫组化分析;5.通过蛋白质印迹法(WB)检测在不同浓度华蟾素作用下SPHK1/STAT3相关蛋白的表达情况;6.将筛选出来的较低表达SPHK1的结肠癌细胞HCT116进行过表达SPHK1稳定株培养;7.Transwell小室观察过表达SPHK1后HCT116的体外迁移能力的变化,并加入华蟾素观察其对迁移能力的影响作用;8.蛋白质印迹法验证华蟾素对过表达SPHK1后HCT116的STAT3通路及其下游转移相关蛋白的变化。结果:华蟾素对结肠癌细胞具有毒性作用,其以时间和浓度依赖性抑制结肠癌的存活率;华蟾素可以抑制结肠癌细胞的增殖、迁移。华蟾素可以抑制两种裸鼠模型的肿瘤生长及转移。免疫组化显示华蟾素可以影响SPHK1、STAT3、MMP-9、E-cadherin的蛋白表达。并且WB检测华蟾素可以抑制SPHK1、STAT3、MMP-9的蛋白表达,促进E-cadherin的蛋白表达。过表达SPHK1的稳定株HCT116的迁移能力增强,华蟾素可以使其增强的迁移能力被抑制,并且WB检测其过表达的SPHK1也同样被抑制,而其下游蛋白STAT3、MMP-9和E-cadherin也受到影响。结论:华蟾素具有明显抑制结肠癌细胞增殖、迁移能力的效果,并可抑制裸鼠体内结肠癌的生长转移,其存在的机制是通过抑制SPHK1/STAT3通路来影响下游转移相关蛋白实现的。
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