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目的:梗阻性黄疸一直是肝胆外科治疗的重点与难点,目前对其致肝损伤的机制尚未完全明确。近年来研究表明,梗阻性黄疸时内毒素所致免疫性肝损伤是其临床诸多严重并发症的关键原因之一,但其致肝损伤的具体免疫机制仍不十分清楚。CD40/CD40L是T细胞免疫中最为关键的共刺激信号,在细胞免疫中发挥至关重要的作用。本研究旨在建立大鼠梗阻性黄疸致肝损伤模型,探讨sCD40L在大鼠梗阻性黄疸肝损伤中的表达水平及其与肝损伤中细胞免疫相关分子TNF-ɑ、IL-8表达的相关性。 方法:选取SPF级大鼠30只,根据随机数据表法将其随机等分为假手术组(A组),模型对照组(B组)和 CD40L单抗组(C组),每组10只。A组仅予游离出胆总管,然后关腹,B、C组采用Yoshidome报道的方法结扎并切断胆总管,建立梗阻性黄疽模型。其中C组于造模结束后立即给予腹腔注射CD40LmAb。三组分别与术后1d、7d、14d三个时间段检测大鼠外周血中 ALT、AST、TBIL、DBIL水平,及酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定TNF-ɑ、IL-8、sCD40L的浓度变化,RT-PCR检测sCD40LmRNA表达。实验结束时取大鼠肝组织HE染色,观察三组大鼠肝组织病理学变化,同时予免疫组织化学法检测CD40L在肝组织中的表达情况。 结果:与假手术组(A)比较,模型对照组(B)、抗CD40L单抗组(C)血浆ALT、AST、TBIL、DBIL、TNF-ɑ、IL-8及sCD40L水平均显著升高(P<0.05),说明梗阻性黄疸后肝细胞损伤进一步加重。B、C两组相比, CD40LmAb组大鼠血清ALT、AST、TNF-ɑ、IL-8及sCD40L显著减低(P<0.05),而 TBIL及 DBIL水平无显著差异(P>0.05)。血清sCD40L与TNF-ɑ、IL-8相关关系。假手术组:sCD40L与TNF-ɑ的关系:r=-0.079,P>0.05;sCD40L与IL-8的关系:r=0.026, P>0.05;模型组sCD40L与TNF-ɑ的关系:r=0.827,P<0.01; sCD40L与IL-8的关系:r=0.925,P<0.01;单抗组sCD40L与TNF-ɑ的关系:r=0.686,P<0.05;sCD40L与IL-8的关系:r=0.689,P<0.05。病理结果显示单抗组肝损伤程度较模型组减轻,免疫组化也证实 CD40L在模型组高表达,而在单抗组表达下降,假手术组几乎不表达。 结论:sCD40L、TNF-α和lL-8在大鼠梗阻性黄疸中随胆道梗阻时间延长及黄疸指数程度加重,呈逐渐增高趋势,且sCD40L水平与TNF-α、lL-8水平成正相关;抗CD40L单克隆抗体对大鼠梗阻性黄疸肝损伤具有一定治疗作用,其机制可能为阻断 CD40/CD40L交联,从而减少TNF-α和lL-8分泌对肝组织自我杀伤作用。