多功能蛋白P62在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌恶性生物学行为影响的研究

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目的:研究多功能应激反应蛋白P62在人胰腺癌细胞系、胰腺癌组织中的表达状况,及其对人胰腺癌细胞系多种生物学行为的影响。  方法:蛋白印记(Western Blot)技术检测P62在人胰腺癌SW细胞、MIA细胞、Panc-1细胞、BXPC-3细胞、ASPC-1细胞、CAP-2细胞中表达状况;通过Western Blot和实时定量 PCR对人胰腺癌及对应癌旁组织的P62差异性表达进行检测;采用免疫组化技术对20例人胰腺癌组织中p62的表达状况进行检测;构建siRNA表达载体(Si-p62),并运用RT-PCR以及Western blot进行验证;Si-p62抑制P62的表达,采用CCK-8法检测单纯干预P62基因后五种化疗药对胰腺癌细胞系增殖活性的影响;通过Transwell实验及划痕实验检测沉默P62表达后,其对人胰腺癌细胞运动功能(侵袭、转移)的影响;PI染色流式细胞术检测细胞周期;采用EDU法检测细胞增殖;通过免疫荧光技术(Immunofluorescence technique)检测P62基因对细胞骨架的影响。  结果:p62在12对胰腺癌组织中较之于对应的癌旁组织呈明显的高表达,P62的高表达差异具有统计学意义。抑制P62基因的表达水平后对人胰腺细胞的细胞周期(G2/M期)产生了阻滞作用,其增殖活性被明显抑制,且胰腺癌细胞的侵袭、转移运动能力也被明显抑制,而免疫荧光染色显示,P62干预的CAP-2细胞骨架形态未发生明显改变。  结论:  1. P62在胰腺癌细胞及组织中呈显著的高表达,其总体表达水平具有统计学意义,可作为下一步研究对象。  2.沉默P62基因的表达后对人胰腺细胞的增殖活性产生了明显的抑制,且对人胰腺癌细胞侵袭、转移能力也产生了很显著的抑制作用。
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