【摘 要】
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目的探讨 TUSC3 基因在非小细胞肺癌（non-small cell lung carcinoma,NSCLC）细胞增殖及进展中的作用及相关分子机制。材料和方法收集惠州市中心人民医院NSCLC标本383例,制作组织芯片,采用免疫组化SP法检测NSCLC组织中TUSC3的表达,分析TUSC3表达与临床病理特征的关系及与EGFR、自噬相关蛋白、Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达之间的相关性。
【基金项目】
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国家自然科学基金面上基金项目（81672441）； 广东省自然科学基金自由申请项目（2016A030313580）； 广东省医学科学技术研究基金项目（A2016A604）；
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目的探讨 TUSC3 基因在非小细胞肺癌（non-small cell lung carcinoma,NSCLC）细胞增殖及进展中的作用及相关分子机制。材料和方法收集惠州市中心人民医院NSCLC标本383例,制作组织芯片,采用免疫组化SP法检测NSCLC组织中TUSC3的表达,分析TUSC3表达与临床病理特征的关系及与EGFR、自噬相关蛋白、Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达之间的相关性。采用定量PCR、Western blot、免疫沉淀和刀豆蛋白A-HRP等主要方法检测新鲜肺癌组织中TUSC3与EGFR及Wnt/β-catenin通路关键蛋白的表达及EGFR糖基化水平。采用扩增阻滞突变系统（ARMS）法检测EGFR基因突变状态。构建TUSC3过表达和敲减细胞模型,明确TUSC3对肺腺癌细胞生物学功能及EMT的影响,并检测TUSC3蛋白是否糖基化EGFR蛋白及激活Wnt/β-catenin信号通路。结果1.TUSC3在NSCLC组织中的表达率（55.09%,211/383）显著高于癌旁正常肺组织（25.85%,99/383）,在腺癌组织中的表达率（63.67%,170/267）显著高于在鳞癌组织中的表达率（35.34%,41/116）,差异具有统计学意义（P<0.01）。在肺腺癌组织中,TUSC3表达与不吸烟、淋巴结转移、远处转移、临床TNM高分期及低分化呈正相关（P<0.05）,而与性别、年龄、肿物大小及脉管浸润无关（P>0.05）。在肺鳞癌组织中,TUSC3表达仅与肿瘤的低分化相关（P<0.01）,而与其它病理特征之间并无相关性（P>0.05）。2.383例患者中EGFR的突变率为44.78%（183/383）,其中女性（58.17%,121/208）、无吸烟史（57.73%,127/220）、腺癌（55.81%,149/267）、≥62 岁患者（62.05%,103/166）具有更高的突变率。TUSC3表达与EGFR突变相关。EGFR突变患者具有更高的TUSC3表达率。3.TUSC3与EGFR的表达不相关,但TUSC3与EGFR的糖基化水平相关,TUSC3过表达可引起EGFR高糖基化。4.细胞自噬相关蛋白BECN1、LC3、P62、Atg5在NSCLC中均低表达。5.Wnt/β-catenin 信号通路相关关键蛋白 β-catenin、cyclinD1、p-ERK,p-Akt1/2/3 在 NSCLC 均高表达。6.EMT标志蛋白Vimentin、N-cadherin在NSCLC中明显高表达;而E-cadherin在NSCLC中明显低表达。7.肺癌中EGFR表达量较癌旁组织低,但磷酸化和糖基化均较癌旁组织高。结论1.TUSC3在肺癌组织中高表达且与EGFR突变状态及糖基化水平密切相关。2.TUSC3通过增强EGFR的糖基化使EGFR异常活化,抑制细胞自噬,使β-catenin表达增强,激活Wnt/β-catenin/cyclinD1信号通路,促进肺癌细胞的增殖、迁徙、侵袭和EMT。
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