第一部分芒柄花黄素对甘油诱导的大鼠急性肾损伤的保护作用目的:揭示芒柄花黄素对甘油诱导的急性肾损伤的保护作用及其分子机制。方法:采用肌肉注射50%甘油构建大鼠急性肾损伤模型。通过检测血浆中肌酐、尿素氮的浓度变化,以及大鼠肾脏的HE染色来揭示芒柄花黄素对甘油引起的急性肾衰竭的保护作用。液质联用方法用于检测血浆和尿液中硫酸吲哚酚的浓度变化。通过TUNEL荧光染色实验检测芒柄花黄素对肾小管上皮细胞凋亡的影响。通过应用透射电镜技术揭示芒柄花黄素对损伤肾脏的肾小管上皮细胞超微结构和凋亡小体的影响。应用Real-time PCR及Western Blot实验测定相关基因及蛋白的表达。结果:相比于甘油造模组,给予芒柄花黄素后的治疗组血浆肌酐、尿素氮明显下降,HE染色结果显示给药后肾小管蛋白管型、空泡样变性明显得到改善,提示芒柄花黄素改善甘油介导的肾损伤。液质联用方法检测大鼠血浆以及尿液中硫酸吲哚酚的浓度,发现与模型组相比给药组血浆中浓度降低,尿液中则升高并且呈剂量依赖性。TUNEL染色发现,芒柄花黄素可以显著缓解肾小管细胞的凋亡。Real-time PCR和Western Blot实验表明Nrf2的核内表达在给予芒柄花黄素之后显著升高,并且调节其下游相关靶基因的表达而发挥保护肾脏的作用。结论:芒柄花黄素可以通过上调Nrf2的表达来调节相关靶基因的表达,进而抑制肾小管上皮细胞的凋亡,发挥肾脏保护作用。第二部分以P53和Oct2为靶点:芒柄花黄素通过促进肾小管上皮细胞的增殖对急性肾损伤的保护作用目的:揭示芒柄花黄素对顺铂诱导的急性肾损伤的保护作用及其分子机制。方法:采用腹腔注射12 mg/kg顺铂构建大鼠急性肾损伤模型。通过检测血浆中肌酐、尿素氮的浓度变化,以及大鼠肾脏的HE染色来揭示芒柄花黄素对顺铂引起的急性肾衰竭的保护作用。肾切片实验揭示造模及给药后转运体的摄取功能变化。Ki-67和BrdU免疫组化实验可检测肾小管上皮细胞的再生情况。利用体外流式细胞仪检测芒柄花黄素对肾小管上皮细胞的增殖作用。应用Real-time PCR及Western Blot实验测定相关基因和蛋白的表达情况并探讨其保护机制。结果:相比于甘油造模组,给予芒柄花黄素后的治疗组血浆肌酐、尿素氮明显下降,HE染色结果显示给药后广泛的上皮细胞肿胀,空泡变性和坏死现象得到明显缓解,提示芒柄花黄素改善顺铂介导的肾损伤。肾切片实验发现Oct2的摄取能力明显下降。BrdU和Ki-67染色发现,肾小管上皮细胞在给药后再生情况明显增加,并且,细胞流式实验揭示芒柄花黄素可以显著抑制由顺铂导致的HK-2细胞增殖阻滞。Real-time PCR和Western Blot实验表明芒柄花黄素通过调节p53的表达而发挥保护作用。结论:芒柄花黄素可以下调Oct2,上调Mrps的表达来减少肾小管上皮细胞中毒物的蓄积,其次通过调节p53的表达来调节相关靶基因的表达,进而抑制肾小管上皮细胞的凋亡,促进其增殖来发挥肾脏保护作用。