论文部分内容阅读
目的：用活化血小板刺激巨噬细胞,建立血小板-巨噬细胞复合体,探讨活化血小板对巨噬细胞分泌尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator, uPA)及受体(urokinase-type plasminogen activator receptor, uPAR)的影响,并研究其与细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer, EMMPRIN)的关系,揭示三者在动脉粥样硬化不稳定斑块中的重要作用。方法：分离昆明小鼠血小板、计数,用ADP对血小板进行活化,采用流式细胞学技术检测血小板活化程度及EMMPIEN的表达；分别在12h、15h、18h和21h时用荧光定量PCR(Real-time PCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)法检测活化血小板刺激巨噬细胞uPA表达的影响。再采用活化和未活化血小板刺激小鼠Raw264.7巨噬细胞,Real-time PCR检测uPA和(?)(?)PAR mRNA,用ELISA法检测uPA,蛋白印记分析westernblot检测uPAR的表达；活化血小板和EMMPRIN单克隆抗体刺激Raw264.7,用Real-time PCR检测(?)PA/uPAR。最后用EMMPIRN重组蛋白刺激Raw264.7,用western blot检测uPAR,用ELISA法检测uPA。结果：1.ADP有效的活化血小板2.ADP诱导血小板上EMMPRIN表达增多3.活化血小板能诱导巨噬细胞上uPA表达,ADP浓度为20μmol/L,在18h时达到峰值,差异有统计学意义(P<0.05)。4.未活化血小板和活化血小板(ADP20μmol/L)分别刺激巨噬细胞,活化血小板组比未活化组uPA/uPAR表达明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。5. EMMPRIN单克隆抗体能抑制活化血小板(ADP20μmol/L)诱导的巨噬细胞上uPA/uPAR表达,差异有统计学意义(P<0.05)。6. EMMPRIN重组蛋白刺激巨噬细胞能诱导巨噬细胞上uPA/uPAR表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：活化血小板能诱导巨噬细胞分泌uPA/uPAR表达增多,EMMPIRN在其中发挥作用。