【摘 要】
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目的探讨LncRNA H19在子宫内膜异位症（Endometriosis,EMs）患者的在位子宫内膜及异位子宫内膜中的表达水平,分析子宫内膜异位症相关发病机制,挖掘参与子宫内膜异位症发病的关键信号通路和枢纽基因,为临床诊疗提供新的标志物和靶点。方法选取2020年09月～2021年10月在唐山市妇幼保健院接受手术治疗患者的子宫内膜组织标本共222例,其中包括内异症患者的异位子宫内膜78例、在位子宫内
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目的探讨LncRNA H19在子宫内膜异位症（Endometriosis,EMs）患者的在位子宫内膜及异位子宫内膜中的表达水平,分析子宫内膜异位症相关发病机制,挖掘参与子宫内膜异位症发病的关键信号通路和枢纽基因,为临床诊疗提供新的标志物和靶点。方法选取2020年09月～2021年10月在唐山市妇幼保健院接受手术治疗患者的子宫内膜组织标本共222例,其中包括内异症患者的异位子宫内膜78例、在位子宫内膜72例和非内异症患者的子宫内膜72例,所有标本均经术后病理证实。依据标本组织来源不同分为:内异症异位内膜（Endometriosis-ectopic endometrium,EMs-ec）组,内异症在位内膜（Endometriosis-eutopic endometrium,EMs-eu）组和对照（Control,Ctrl）组。1随机选取EMs-ec组34例、EMs-eu组32例和Ctrl组30例,提取组织中RNA,应用RT-qPCR方法检测LncRNA H19 mRNA的表达量,比较不同组织来源的子宫内膜组织中LncRNA H19 mRNA表达水平。2随机选取EMs-eu组15例、Ctrl组15例,分离培养原代子宫内膜间质细胞,提取细胞中RNA,应用RT-qPCR方法检测LncRNA H19 mRNA在子宫内膜间质细胞中的表达量,并进一步以10-8mol/L浓度的雌激素刺激内异症患者的在位子宫内膜间质细胞（Endometriosis-eutopic endometrial stromal cells,EMs-eu ESCs）,作用60 min,应用RT-qPCR方法再次检测LncRNA H19 mRNA的表达量,比较雌激素刺激后,EMs-eu ESCs中LncRNA H19 mRNA表达水平变化。3从GEO数据库,用关键词EMs检索,选取数据集GSE23339、GSE25628和GSE171154进行分析。获取数据集EMs-ec组、EMs-eu组和Ctrl组标本的原始序列数据,通过生信工具对原始数据进行差异表达分析、富集分析、蛋白互作网络分析等,筛选子宫内膜异位症发病机制相关信号通路和关键候选基因。通过NCBI和Ensembl数据库,对关键候选基因进行条件性检索,筛选标准设为次要等位基因频率（Minor allele frequency,MAF）＞0.05,应用SNP info Web Serve软件对位点进行转录因子结合预测分析,最终确定本研究将进一步验证的基因位点。将临床获取的新鲜组织标本,其中EMs-ec组78例、EMs-eu组72例和Ctrl组72例,提取组织DNA,应用一代基因测序与单核苷酸多态性（Single nucleotide polymorphism,SNP）基因突变位点分析,比较不同组织来源样本的基因突变频率。结果1比较不同组织来源子宫内膜组织中LncRNA H19表达水平显示,与Ctrl组相比,EMs-ec组和EMs-eu组中LncRNA H19的表达明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;EMs-ec组和EMs-eu组相比,表达无明显差异（P＞0.05）;2比较不同组织来源子宫内膜间质细胞中LncRNA H19表达水平显示,与Ctrl组比较,EMs-eu组细胞中LncRNA H19的表达水平显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;以10-8mol/L雌激素刺激后,EMs-eu组细胞中LncRNA H19的表达水平升高更明显,差异有统计学意义（P＜0.05）;3筛选出BMP6、RAD54B、ECT2及ESRRG基因是子宫内膜异位症发病机制相关的关键候选基因。进一步临床样本验证显示,与Ctrl组比较,EMs-ec组和EMs-eu组内膜中RAD54B基因的SNPrs12681366（T＞C）位点基因型突变频率及等位基因突变频率显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）,而EMs-ec组和EMs-eu组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论1 LncRNA H19在子宫内膜异位症患者的子宫内膜组织及子宫内膜间质细胞中均高表达,LncRNA H19与雌激素参与的信号通路有关。2基因BMP6、RAD54B、ECT2及ESRRG参与了LncRNA H19调控的子宫内膜异位症发病机制相关信号通路。3在位子宫内膜RAD54B基因SNPrs12681366（T＞C）位点的突变频率检测可以作为内异症诊断和监测预后的重要指标。图12幅;表19个;参157篇。
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