拟南芥菜两个ABA诱导基因的cDNA克隆和表达分析

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干旱,这是一个越来越严重的世界性问题.在缺水的生存环境中,植物如何调整自己的状态去适应这类胁迫,这也是一个全世界都在关注的问题.两个具缺水胁迫和ABA诱导表达特性并已经测序的拟南芥基因组DNA克隆(SC3和SC12)(数据库搜索表明它们编码新的未知功能蛋白质)已经成功的筛选出来,在此工作的基础上,该文将与这两个基因组DNA克隆相关的cDNA序列筛选出来,然后对其表达进行检测和分析,为进一步对这两个亚克隆所对应的基因的结构及其在胁迫应答反应中的功能做深入的研究奠定基础.为此首先提取用ABA处理过的拟南芥菜的总RNA,将其反转录成双链cDNA,加接头之后PCR扩增双链cDNA;然后通过杂交,用特异性的探针将目的cDNA筛选出来,得到与SC3相关的一条cDNA序列和与SC12相关的两条cDNA序列.目前,已完成与SC12相关的两条cDNA其中一条的测序,长度为678bp,数据库中与此对应的cDNA长度为698bp.将此段cDNA与数据库比对,显示同源性为96%,比数据库中少20bp,可能是因为反转录合成的cDNA不是全长所致.与SC3相关的一条cDNA序列和另外一条SC12相关的cDNA序列正在测序之中.初步的RT-PCR检测分析SC3和SC12在ABA诱导下的表达情况.结果检测到与SC3相关的一段cDNA序列和与SC12相关的两段cDNA序列,这个结果与基因组扩增结果有明显的不同.该文通过PCR,杂交等分子生物学的方法成功的筛选到拟南芥菜两个ABA诱导基因组DNA克隆SC3和SC12的三条cDNA克隆,然后通过RT-PCR初步分析了这两个基因在ABA诱导下的表达情况,证实了数据库中标注的几个相关推测或假设蛋白,但结果与数据库中的推测并不完全相同.这两个基因与ABA诱导的确切关系尚待进一步的研究.
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