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目的：重症急性胰腺炎(SAP)是一种以血流动力学改变和全身炎症反应为特征、死亡率高的疾病。SAP的发病机制至今尚未阐明，临床尚无有效的治疗措施。细胞因子的释放造成了全身性的反应，如：全身炎症反应综合症(SIRS)、多器官功能障碍综合征(MODS)、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、败血病等。此外细胞因子在作为SAP主要致死原因的多器官衰竭中起着轴心作用。关于细胞因子诱导SIRS的二次打击学说则解释了不同个体对SAP的多样性反应。银杏苦内酯B(GinkgolideB，代号为BN52021)是银杏叶提取物中重要的有效成分，对SAP具有治疗作用，是炎性介质血小板活化因子(PAF)的强拮抗剂，具有抗炎、抗血栓和抗休克形成等多种药理作用，但其作用机制至今未明。PAF在体内主要通过特异性的PAF受体(PAFR)将信号传递至细胞内调节细胞的生命活动。PAFR属于七次跨膜的G蛋白偶联受体家族，活化后偶联于特异性的异三聚体G蛋白，开启胞内相应的信号转导通路。本实验旨在观察SAP大鼠血中促炎因子和抗炎因子的变化以及胰腺组织Gαi2和Gαq蛋白表达量的改变，探讨BN52021对SAP的治疗作用及其可能的细胞内信号转导机制。
方法：1雄性Wistar大鼠180只随机分为正常对照组(NC，n=60)，SAP组(SAP，n=60)及BN52021治疗组(BN,n=60)，每组再分为6个时相点(1h、2h、3h、6h、12h、24h)，各组10只。
2术前24小时禁食，自由饮水。0.4％戊巴比妥钠(40mg·kg-1)腹腔注射麻醉。仰卧位固定后，备皮、消毒、铺无菌巾，于上腹正中做2cm切口进入腹腔。找到大鼠的十二指肠和胆胰管后，用无创血管夹夹住胆胰管肝端，用钝头针头经十二指肠浆肌层行胆胰管逆行穿刺术。穿刺成功后，微量注射器逆行胆胰管注射5％牛磺胆酸钠(1mL·kg-1)，推注速度0.20ml·min-1。推药后用无创血管夹夹住胆胰管入十二指肠处，观察10分钟，去除血管夹，确认腹腔内无活动性出血后，两层关腹并用无菌纱布覆盖伤口，NC组开腹后仅翻动十二指肠并触摸胰腺数次关腹。术后15分钟BN组股静脉注射BN52021(5mg·kg-1)，NC组、SAP组股静脉注射等量生理盐水。
3各组分别在处理后1h、2h、3h、6h、12h、24h麻醉并开胸和开腹，迅速采集心脏血液和胰腺组织。采用全自动生化分析仪检测血清淀粉酶，同时应用ELISA技术测定1h、6h和12h血浆细胞因子水平。取一部分胰腺组织放入液氮速冻，-80℃超低温冰箱妥善保存；另一部分以中性缓冲甲醛固定(40g·L-1)，石蜡包埋切片后HE染色制片，观察胰腺组织的病理学变化。蛋白免疫印迹法(westernblot)测定胰腺组织Gαi2和Gαq蛋白含量，用Image-ProPlusVersion4.5图像分析系统进行定量分析。
结果：1血浆淀粉酶结果显示，各时相点SAP组与NC组相比较显著升高(P＜0.05)，BN组也较NC组显著升高(P＜0.05)，但BN组在1h,2h,3h,6h和24h较SAP组显著降低(P＜0.05)。病理学结果显示，SAP组随着时间的推移，胰腺及周围组织水肿、出血和坏死面积逐渐扩大，程度逐渐加重，而BN组较SAP组的组织结构破坏相对较轻，NC组胰腺及周围组织结构始终大致正常。这些说明SAP动物模型制作是成功的，BN52021也有一定的治疗效果。
2SAP大鼠促炎因子和抗炎因子均显著升高。BN52021能降低血浆促炎因子含量，在SAP早期降低抗炎因子IL-10含量、提高IL-12和细胞因子拮抗剂sTNF-αR含量。血浆TNFα水平在1h时各组未见明显差异，6h时SAP组与NC组、BN组相比具有显著性差异(P=0.001，P=0.003)，12h时SAP组与NC组、BN组相比也具有显著性差异(P=0.020,P=0.000)。血浆PAF水平在1h时各组存在明显差异，NC组与SAP、BN组比较，具有显著性差异(P=0.000，P=0.000)；在6h时相点，SAP组与BN、NC组血浆PAF水平具有显著性差异(P=0.000，P=0.000)；12h时SAP组与BN、NC组血浆PAF水平具有显著性差异(P=0.045、P=0.001)。血浆IL-10水平在1h时各组存在明显差异，1h时SAP组与NC组和BN组相比具有显著性差异(P=0.000,P=0.006)。血浆IL-12水平在1h时各组存在明显差异，BN组与SAP、NC组比较，具有显著性差异(P=0.011，P=0.000)；6h时SAP组与NC组相比具有显著性差异(P=0.005)；12h时SAP组与NC组相比也具有显著性差异(P=0.037)。血浆sTNF-αR水平在1h时各组存在明显差异，SAP与NC、BN组比较，具有显著性差异(P=0.001，P=0.015)，BN与NC组比较，具有显著性差异(P=0.000)；在6h、12h时相点，只有BN组与NC组血浆sTNF-αR水平具有显著性差异(P=0.005，P=0.003)。在TNF-α与sTNF-αR、PAF与IL-10、PAF与IL-12、PAF与sTNF-αR之间分别存在线性相关，并分别建立相关方程。
3SAP组大鼠胰腺组织Gαi2、Gαq含量与NC组相比显著增高(P＜0.05)，BN组SAP大鼠胰腺组织Gαi2、Gαq含量显著低于SAP组(P＜0.05)。
结论：1逆行胰胆管内注射5％牛磺胆酸钠可以成功制备大鼠SAP模型，而且BN52021对SAP有一定的治疗作用。
2促炎和抗炎细胞因子与SAP的病理生理变化密切相关，SAP发生后，抗炎与促炎因子之间的平衡被打破，使得两类细胞因子均出现异常表达。PAF是炎症反应的关键性介质，在PAF与IL-10、IL-12、sTNF-αR之间存在相关性，PAF表达量的改变与三种细胞因子相关。BN52021作为PAF的拮抗剂对SAP大鼠细胞因子表达具有显著影响，促使两种促炎因子血浆水平降低；在SAP发病早期使抗炎因子IL-10血浆含量减少，而对IL-12血浆含量有提升作用。
3SAP发生后，胰腺组织Gαi2和Gαq蛋白含量增高，可能通过cAMP-PKA和IP3-Ca2+途径完成细胞内信号转导，导致炎症反应延续并放大。BN52021通过降低SAP大鼠胰腺组织Gαi2和Gαq含量发挥治疗作用。