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目的:蛛网膜下腔出血所致早期脑损伤是指在发病72小时以内发生的机制复杂一个初始过程,是蛛网膜下腔出血高致死率和致残率的主要原因,对早期脑损伤的机制及抑制其发生发展过程的研究一直是临床与基础研究的焦点。谷氨酸积聚可致NMDA受体过度激活使Ca2+内流,导致细胞内Ca2+超载触发有害级联反应,引起兴奋神经毒性,导致细胞凋亡。这可能是早期脑损伤的主要机制。研究发现,NMDA受体调节异常与细胞钙离子超载在多种中枢神经系统疾病的发病机制中起重要作用,但这二者异常是否与蛛网膜下腔出血所致早期脑损伤密切相关,不得而知。本研究,通过在体及离体研究的方式,探讨NNDA受体在蛛网膜下腔出血所致早期脑损伤中的影响,为早期脑损伤的防治,提供新的研究方法及研究思路。方法:离体实验,取SD大鼠的原代皮层神经元进行培养、分离及鉴定,用氧合血红蛋白(OxyHb)诱导神经元损伤模型,利用CCK-8法检测各组神经元细胞活力,TUNEL法检测各组神经元细胞凋亡情况,通过免疫荧光及Western Blot检测细胞中相关凋亡因子Bax、Bcl-2、Caspase-3阳性表达。通过qRT-PCR检测细胞中相关凋亡因子Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表达情况。体内实验,用SD大鼠制作体内视交叉上池注血SAH模型HE染色观察脑组织神经元形态改变,通过免疫组化及Western Blot检测细胞中相关凋亡因子Bax、Bcl-2、Caspase-3及NR2A及NR2B 阳性表达。通过qRT-PCR检测细胞中相关凋亡因子Bax、Bcl-2、Caspase-3及NR2A及NR2B mRNA表达情况。结果:在细胞实验中,成功培养并分离了 SD大鼠原代皮层神经元细胞,通过CCK-8法检测可知10 μ m浓度OxyHb干预后神经元细胞活力最符合实验需要,成功筛选了OxyHb诱导神经元出血损伤细胞模型的条件。在模型中应用10μm浓度的MK-801后的神经元细胞活力显著上升,故选择10 μm浓度的MK-801作为对损伤神经元细胞明显改善的浓度。通过TUNEL法检测各组神经元凋亡情况,OxyHb诱导出血的模型组内凋亡细胞比control组明显增加,加了 NMDA受体抑制剂MK-801后凋亡细胞比模型组明显减少。免疫荧光检测细胞中相关凋亡因子Bax、Bcl-2、Caspase-3阳性表达,模型组Bax抗体的阳性细胞比control组明显增加,MK-801组比模型组的阳性细胞有所下降。Bcl-2抗体在模型组的阳性细胞比control组稍稍下降,MK-801组比模型组的阳性细胞增加。Caspase-3抗体在模型组的阳性细胞比control组明显增加,MK-801组比模型组的阳性细胞有所下降。通过qRT-PCR检测各组mRNA表达情况,可知OxyHb模型组Bax mRNA表达较control组高且差异具有极显著统计学意义(P<0.001),MK-801组较OxyHb模型组Bax mRNA表达下降且差异极具有显著统计学意义(P<0.001),Bcl-2 mRNA表达在OxyHb模型组较control组降低且差异具有显著统计学意义(P<0.01),MK-801组较OxyHb模型组高且差异具有统计学意义(P<0.05),Caspase-3 mRNA表达在OxyHb模型组较control组高且差异具有极显著统计学意义(P<0.001),MK-801组较OxyHb模型组降低且差异具有显著统计学意义(P<0.01)。通过WB实验检测可知,与control比较,促凋亡因子Bax蛋白表达在OxyHb诱导的模型组中升高,其差异不具有统计学意义,Caspase-3蛋白表达在模型组中升高,其差异具有统计学意义(P<0.05),加入MK-801后Bax、Caspase-3均降低,但均不具有统计学意义。抗凋亡因子Bcl-2蛋白表达在OxyHb诱导的模型组中降低,其差异具有显著统计学意义(P<0.01),加入MK-801后升高,不具有统计学意义。在动物实验中,各组在干预48h后对各组动物行为学评分,大鼠模型组及MK-801组较于假手术组神经功能评分均降低,均有显著统计学差异(p<0.001)。MK-801组较模型组稍微升高,但没有统计学意义。HE染色观察脑组织神经元形态改变,假手术组神经元细胞呈(椭)圆形或锥形,细胞核完整清晰呈圆形,HE染色为浅紫色。SAH模型组神经元细胞胞体缩小,核固缩。MK-801抑制剂组,神经元损伤情况较模型组好,神经元细胞呈(椭)圆形或锥形,多数细胞胞体完整。免疫组化检测细胞中相关凋亡因子Bax、Bcl-2、Caspase-3及NR2A及NR2B阳性表达,和sham组比较,SAH模型组Bax、Caspase-3平均光密度值升高,且差异具有统计学意义(p<0.01),Bcl-2平均光密度值下降,且差异具有统计学意义(p<0.05),NR2A平均光密度值升高,且差异具有显著统计学意义(p<0.01),NR2B平均光密度值升高,不具有统计学意义。MK-801组比SAH模型组Bax、Caspase-3及NR2B平均光密度值稍降低,且都不具有统计学意义,Bcl-2稍升高且差异具有统计学意义(p<0.05),NR2A平均光密度值稍升高,且都不具有统计学意义。通过qRT-PCR检测各组mRNA表达情况,和sham组相比,SAH模型组Bax mRNA表达升高且差异具有极显著统计学意义(P<0.001),Bcl-2 mRNA表达降低但不具统计学意义,Caspase-3 mRNA表达升高且差异具有极显著统计学意义(P<0.001),NR2A mRNA表达升高且差异具有统计学意义(P<0.05),NR2B mRNA表达升高且差异具有极显著统计学意义(P<0.001)。和MK-801组比较,SAH模型组Bax、Caspase-3 mRNA表达升高具有显著统计学意义(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达降低但不具显著性差异,NR2A mRNA表达升高但不具有显著统计学意义,NR2B mRNA表达升高且具有极显著统计学意义(P<0.001)。通过WB实验可知与sham组比较,促凋亡因子Bax蛋白表达在SAH模型组中升高,差异具有显著统计学意义(P<0.01),Caspase-3蛋白表达在SAH模型组中升高,差异不具有统计学意义,Bcl-2蛋白表达在SAH模型组中降低,差异具有显著统计学意义(P<0.01),NR2A蛋白表达在SAH模型组中升高但差异不具有统计学意义,NR2B蛋白表达在SAH模型组中升高且差异具有极显著统计学意义(P<0.001)。在加入MK-801后SAH模型组Bax蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05),Caspase-3蛋白表达降低,但不具有统计学意义,Bcl-2蛋白表达升高,差异具有统计学意义(P<0.05),NR2A蛋白表达降低且差异具有统计学意义(P<0.05),NR2B蛋白表达升高且差异具有显著统计学意义(P<0.01)。结论:通过调控NMDA受体可在一定程度上逆转实验性蛛网膜下腔出血大鼠所致早期脑损伤引起的神经元细胞凋亡。