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目的:探讨B型钠尿肽(Brain/B-type natriuretic peptide, BNP)抑制心脏成纤维细胞(Cardiac fibroblasts, CFs)增殖机制及其与TGF-β、钠尿肽受体(natriuretic peptide receptors, NPRs)的信号转导途径的关系。方法:采用胰酶消化法和差速贴壁法提取原代乳鼠心脏成纤维细胞并纯化,以形态学及免疫组织化学进行细胞鉴定;原代CFs经无血清DMEM培养24h同步化处理后,采用重组心肌营养素(Cardiotrophin-1,CT-1)刺激细胞,加入不同浓度BNP(5×10-4mol/L、5×10-5mol/L、5×10-6mol/L、5×10-7mol/L、5×10-8mol/L、5×10-9mol/L)进行Brdu增殖检测实验;以CFs为对象,同步化处理后,加入BNP、TGF-β1的I型受体特异性抑制剂SB-431542、钠尿肽受体A (natriuretic peptide receptor-A, NPR-A)抑制剂CANF4-23、BNP+ SB-431542和BNP+CANF4-23干预,放射免疫检测cGMP;以CFs为对象,同步化处理后,用CT-1刺激增殖24h,分别加入BNP和SB-431542,分为BNP组、SB-431542组和BNP+SB-431542组,干预后收集培养液检测细胞因子TGF-β1浓度。收集细胞提取总RNA,逆转录为cDNA后,行荧光实时定量PCR检测BNP组、SB-431542组和BNP+SB-431542组smad4 mRNA变化。结果:1.采用胰酶消化法和差速贴壁法原代提取纯化的CF s存活率高,纯度好。2.不同浓度的BNP对CT-1刺激细胞增殖的抑制程度不同,随着BNP浓度减小,抑制CT-1刺激心肌成纤维细胞的增殖作用减弱,存在明显的剂量依赖效应,但两者并非简单的反比关系,在5×10-6～5×10-7mol/L时变化最显著。3.各实验组在加药后CFs胞内cGMP水平变化不一,BNP组和BNP+SB-431542组胞内cGMP水平分别为6.16±1.30 pmol/ml和6.01±1.17 pmol/ml,与对照组相4.57±1.25pmol/ml相比明显升高(P<0.05,n =6),BNP组和BNP+SB-431542组之间没有显著区别。其他各药物组与对照组相比没有显著差异(P>0.05,n =6)。4. BNP组、SB-431542组、BNP+SB-431542组三组TGFβ1浓度与对照组相比明显降低(P<0.05),但不同药物组之间没有显著差异(P>0.05)。BNP组、SB-431542组、BNP+SB-431542组三组较正常组smad4 mRNA水平明显下降(P<0.05),并且BNP+SB-431542组smad4 mRNA表达水平显著低于BNP组和SB-431542组(P<0.01),而后两者smad4 mRNA表达无明显差异(P>0.05)。结论:1. BNP抑制CT-1刺激增殖的CFs有剂量依赖性,但非普通的正比关系,可能与CF膜表面NPRs受体有关。2. BNP能明显升高CFs胞内cGMP水平,该效应可能通过NPR-A介导。TGF-βⅠ型受体特异性抑制剂不能改变CFs胞内cGMP水平。3. BNP能抑制CFs胞内Smad4mRNA的表达量显著低于SB-431542作用,BNP抑制心脏成纤维细胞增殖机制除了TGF-βsmad2/3信号途径,还可能存在TGF-β非smad2/3信号传导途径。