目的:牙周炎导致牙周组织缺损及后续的修复再生问题仍是目前临床工作的难点。目前牙周炎治疗的方法主要有牙周基础治疗、手术清创治疗及抗生素药物。其中抗生素类药物使用会产生耐药以及疗效的不确定性,长期服用可导致口腔微生态菌群失调。况且,在特殊的口腔炎性微环境下,要实现牙周缺损组织的再生与修复尤为困难。中药具有低毒高效、高度耐药、抗炎、促免疫以及抗肿瘤等多重生物学效应,被广泛应用于临床治疗。白花胡前丁素（Peucedanum praeruptorum Dunn,PD）是从前胡中分离得到的吡诺香豆素类化合物,先前报道了其具有显著的抗炎和抗肿瘤活性。因此,本研究拟探讨PD对牙周炎患者牙周膜细胞增殖与成骨活性的影响,为牙周炎临床药物治疗提供一种低毒高效的策略。方法:1.人牙周膜细胞原代培养及相关鉴定（1）分别从健康患者（正畸减数/上颌智齿）患牙上提取健康人牙周膜细胞（H-PDLCs）以及从牙周炎患者（牙槽骨重度吸收/III°松动）患牙上提取炎性人牙周膜细胞（P-PDLCs）进行原代培养。（2）利用免疫荧光鉴定H-PDLCs及P-PDLCs的来源。（3）采用茜素红S（ARS）染色鉴定H-PDLCs及P-PDLCs诱导成骨分化能力。（4）对于已鉴定的细胞,按照实验要求进行分组:健康细胞组（阴性对照组-H）,炎性细胞组（炎性组-P）、不同浓度PD组（实验组）、盐酸米诺环素组（阳性对照组-YS）。采用CCK-8检测健康细胞组及炎性细胞组在1天、2天、3天、5天时细胞增殖情况,且以抗生素类药物-盐酸米诺环素（100ug/ml）作为阳性对照,检测PD浓度为10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml、40ug/ml时对P-PDLCs毒性及增殖的影响。2.PD对P-PDLCs抗炎及诱导成骨分化能力的评价（1）通过ELISA检测P-PDLCs中炎症因子TNF-ɑ和IL-1β的表达情况。（2）采用实时聚合酶链反应（RT-q PCR）检测各实验组中炎症因子（TNF-ɑ和IL-1β）及成骨相关因子（RUNX-2、OCN和ALP）m RNA的表达情况。（3）采用茜素红S（ARS）染色评估PD对P-PDLCs诱导成骨分化能力的影响。（4）通过免疫荧光观察PD作用下P-PDLCs细胞骨架结构改变的情况。（5）蛋白印迹（WB）检测PD作用下P-PDLCs成骨相关蛋白RUNX-2及OCN的表达情况。结果:H-PDLCs及P-PDLCs形态主要呈长梭形,似成纤维细胞。培养一段时间后,镜下观察发现P-PDLCs相较于H-PDLCs显得更长且体积较大。免疫荧光染色得出,H-PDLCs及P-PDLCs中波形蛋白表达,而角蛋白不表达,可证明H-PDLCs及P-PDLCs均来源于间充质,是人牙周组织来源。茜素红S（ARS）染色结果见大小不等的、橙红色的小钙化结节,表明H-PDLCs及P-PDLCs都具有诱导成骨分化的能力,且发现H-PDLCs组钙化结节多于P-PDLCs组,说明其成骨分化能力强于P-PDLCs。CCK-8结果发现,H-PDLCs及P-PDLCs的增殖有时间依赖性,随着时间的延长呈正向增长,且H-PDLCs增殖较P-PDLCs快（P＜0.05）,PD浓度在40ug/ml以下对P-PDLCs细胞活力无明显影响,且PD能在一定程度上促进P-PDLCs的增殖（P＜0.05）。ELISA结果示,从牙周炎患者牙周韧带中提取的牙周膜细胞中炎性因子TNF-α及IL-1β的含量显著高于从健康患者牙周韧带中提取的牙周膜细胞（P＜0.05）,这表明从牙周炎患者牙周组织中提取的细胞呈炎性表达,可以记为炎性牙周膜细胞,即P-PDLCs。PD作用于P-PDLCs后,炎性因子TNF-ɑ及IL-1β的表达有所降低,且随着PD浓度的增加呈线性降低（P＜0.05）,说明PD对P-PDLCs有显著的抗炎活性。但盐酸米诺环素组炎性因子TNF-ɑ和IL-1β的表达较PD组低,表明PD虽具有一定抗炎功能,但抗炎效果不及盐酸米诺环素组。RT-q PCR结果显示,PD对P-PDLCs炎症因子TNF-ɑ及IL-1β均有明显抑制作用（P＜0.05）。茜素红S（ARS）染色、PCR及WB结果表明:PD对P-PDLCs成骨及成骨相关基因RUNX-2、ALP及OCN的表达都有明显促进作用,但P-PDLCs诱导成骨分化能力较H-PDLCs性能弱（P＜0.05）。PD在20μg/ml和30μg/ml时,RUNX-2、ALP及OCN等成骨相关因子的m RNA表达显著增加（P＜0.05）,且与盐酸米诺环素组m RNA的表达相近,在PD浓度为20μg/ml时RUNX-2、ALP及OCN等成骨相关因子的m RNA表达最高,此结果表明PD浓度为20μg/ml时可能是成骨效果最好的药物浓度。免疫荧光染色结果表明在无PD作用时,P-PDLCs表现为典型成纤维细胞的形态,细胞呈长梭状,较细长,且细胞周围伸出细小的伪足。在PD作用下,细胞形态开始出现一些改变,细胞由长梭形变为矮胖形,周围伪足减少了,细胞变得较圆润光滑,细胞核位于视野中央更加清晰;当盐酸米诺环素（100ug/ml）作用时,细胞形态与PD（20ug/ml）作用下见相似,变得比较光滑圆润,伪足减少。本实验结果表明,不论是PD还是盐酸米诺环素对细胞形态都有一定的改变,此次发现应该是首次发现此类现象,可能为后续实验研究起到一定的理论依据。结论:本研究发现,PD对P-PDLCs的增殖及诱导成骨分化均具有显著的促进作用,可上调成骨相关基因RUNX-2、ALP及OCN的表达,表现出一定的成骨作用,同时PD还可抑制P-PDLCs中TNF-ɑ和IL-1β相关炎症因子的表达,这表明PD具有显著的抗炎活性。显然,PD作为一种低毒高效的中药可能对牙周炎临床药物辅助治疗具有积极的应用价值。