【摘 要】
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子宫内膜异位症（Endometriosis,Ems）是一种良性疾病,发生于大约15%的育龄期妇女,其主要症状是慢性盆腔疼痛、痛经和不孕症。该病的特征是子宫内膜生长于子宫腔以外的地方,该特征也是疾病发生的一个重要病理基础。因此抑制子宫内膜细胞的侵袭可能为有效的治疗手段。近年来,大量研究报道micro RNAs（miRNAs）在子宫内膜异位症的发生与发展中发挥重要作用,但是有关子宫内膜异位症中的子宫内
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子宫内膜异位症（Endometriosis,Ems）是一种良性疾病,发生于大约15%的育龄期妇女,其主要症状是慢性盆腔疼痛、痛经和不孕症。该病的特征是子宫内膜生长于子宫腔以外的地方,该特征也是疾病发生的一个重要病理基础。因此抑制子宫内膜细胞的侵袭可能为有效的治疗手段。近年来,大量研究报道micro RNAs（miRNAs）在子宫内膜异位症的发生与发展中发挥重要作用,但是有关子宫内膜异位症中的子宫内膜间质细胞的侵袭性研究还不够深入。目的:本实验旨在研究micro RNAs对子宫内膜间质细胞（Endometrial stromal cells,ESCs）侵袭的影响,探讨miRNA调控ESCs侵袭的具体机制,阐明miR-202与k-Ras/ERK1/2信号通路在ESCs侵袭中相互调控的作用,为子宫内膜异位症的预防和治疗提供新的靶点。方法:1通过挖掘GEO数据库中公开发表的micro RNA高通量芯片数据进行分析,筛选在卵巢子宫内膜异位症患者的异位子宫内膜和在位子宫内膜组织中表达水平失调的micro RNA,并通过查阅分析文献和具体分析micro RNA芯片数据确定进一步研究的目标micro RNA,并通过实时荧光定量PCR对30例子宫内膜异位症和15例正常内膜组织患者扩大样本验证芯片的数据结果。2通过向ESCs内转染miR-202 mimics,检测miR-202对ESC细胞的侵袭的影响,以进一步证实miR-202的表达变化是调控ESCs侵袭的可能机制。3在线软件对miR-202的靶基因进行预测,通过向ESCs内转染miR-202mimics检测靶基因蛋白变化。同时采用双荧光素酶试验验证miR-202与靶基因之间的相互作用。q RT-PCR检测靶基因在配对子宫内膜异位症患者在位内膜组织和异位内膜组织的表达,进一步分析其表达水平与miR-202的相互作用。4通过Western blot、Transwell和wound healing方法观察干扰靶基因k-Ras的表达对ESCs侵袭中功能的影响。通过上述同样的方法观察过表达靶基因对miR-202 mimics在ESCs侵袭中功能的影响5采用Western blot检测过表达靶基因对miR-202 mimics在p-Raf1、pMEK和p-ERK的表达方面的影响。结果:1 Microarray分析结果显示多条micro RNAs表达显著改变,其中有些和前人报道相似,间接证实该方法的可信度;与正常人对照组相比较,子宫内膜异位症患者子宫内膜组织中miR-202显著低水平;与正常内膜组织相比,miR-202在异位症患者异位内膜组织中的表达水平显著下降。2过表达miR-202通过调控上皮间质转换（EpithelialMesenchymal Transition,EMT）进程,抑制ESCs细胞侵袭的能力。3生物信息学与双荧光素酶试验研究显示k-Ras是miR-202的靶点。过表达miR-202抑制其蛋白表达。进一步的研究显示与对照组相比,子宫内膜异位症患者子宫内膜组织中k-Ras显著高水平,并且与miR-202负相关。4干扰靶基因k-Ras明显抑制ESCs细胞侵袭能力,而靶基因k-Ras过表达削弱miR-202过表达对ESCs细胞侵袭和运动能力的抑制作用。5 Western Blot检测结果显示过表达miR-202-5p在对Raf1、MEK和ERK的磷酸化有明显的抑制作用,而过表达k-Ras能够减弱过表达miR-202的抑制作用,暗示我们miR-202通过抑制k-Ras/Raf1/MEK/ERK信号通路抑制ESCs细胞侵袭。结论:过表达miR-202通过调控上皮间质转换（EpithelialMesenchymal Transition,EMT）进程,抑制ESCs细胞侵袭的能力,k-Ras是miR-202的功能性靶基因,过表达miR-202通过阻断ESCs中kRas/Raf1/MEK/ERK信号通路的激活而抑制ESCs的侵袭和迁移。
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