【摘 要】
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实验目的:胃肠道相关肿瘤严重威胁着人类的生命健康。现有的胃癌诊疗结果仍不让人满意,主要是由于胃癌难以早期发现,且现有的药物治疗效果不理想,因此迫切需要寻找一种寻找新的、
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实验目的:胃肠道相关肿瘤严重威胁着人类的生命健康。现有的胃癌诊疗结果仍不让人满意,主要是由于胃癌难以早期发现,且现有的药物治疗效果不理想,因此迫切需要寻找一种寻找新的、有效的分子载体,用于胃癌的诊断及靶向药物治疗,以提高胃癌的预后。本实验的目的是利用噬菌体展示技术,通过对胃癌组织表达的蛋白质及胃黏膜组织表达的蛋白质进行筛选、对比分析,寻找胃癌特异性抗原,以期为胃癌检测及胃癌的靶向治疗提供新的分子载体。标本选择:随机选取于我科行胃癌根治术的患者5例(术后病理证实均为胃腺癌),术中取胃癌组织及正常胃黏膜组织各约3克左右。实验方法:将胃癌组织和正常胃黏膜组织经过剪碎、研磨、裂解细胞、离心等程序,弃去沉淀后分别制备成蛋白匀浆。各取适量分别经过双向电泳、硝酸银染色等处理,制备成双向电泳(2-DE)凝胶图,将每个凝胶用软件分析后建立胃癌组织及胃黏膜组织蛋白平均胶图。选取每个病人的胃癌及胃黏膜2-DE凝胶各两张进行电转聚偏二氟乙烯(PVDF)膜,然后用制备的胃癌组织蛋白包被于微孔板中作为抗原对胃癌噬菌体抗体库进行淘筛,将结合的噬菌体洗脱下来感染大肠杆菌进行扩增,取富集后的噬菌体抗体与制备的PVDF膜行免疫印迹实验,能与噬菌体特异性结合的PVDF膜中蛋白质点将在试验中显色。显色后将胃癌组及胃黏膜组PVDF膜对比分析,找出两组之间的差异蛋白点,这些差异点预计为胃癌特异表达的蛋白质。通过PVDF膜差异蛋白点与银染的平胶图对比,挖取两组凝胶中的差异蛋白点行质谱分析。实验结果:通过对比分析,发现七个胃癌组织表达而正常胃黏膜不表达的能与噬菌体特异性结合的抗原。为胃癌的早期诊断提供了候选的标志蛋白,也为胃癌的治疗提供了新的方向。
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