第一部分酸敏感离子通道（ASICs）在三叉神经节中的表达及作用目的：ASICs是表皮钠通道/退化蛋白家族的成员，它可以被酸性外液激活，主要分为ASIC1a、ASIC1b、ASIC2a、ASIC2b、ASIC3a、ASIC4六种亚单位，目前已有多篇报道ASICs在外周神经系统中的存在，并参与了偏头痛等多种疼痛行为。面部神经痛是一种常见的临床症状，三叉神经节是唯一支配颜面部感觉的传入神经。但是目前ASIC各型在三叉神经节中的确切表达以及ASICs在面部神经痛中的作用尚未确定。本部分旨在研究三叉神经节中ASIC各型的表达及其在面部炎性痛中的作用。方法：采用RT-PCR，实时定量PCR和western blot鉴定ASIC各型在三叉神经节中的表达；面部注射逆向示踪剂，采用免疫荧光研究支配面部感觉的三叉神经上ASICs的表达和分布；急性分离三叉神经元，采用全细胞膜片钳在三叉神经元上记录酸诱导的电流；采用western blot和免疫荧光研究福尔马林炎症模型对三叉神经节ASICs表达的影响；采用全细胞膜片钳研究福尔马林炎症模型对三叉神经节ASICs电流的影响；采用福尔马林动物模型研究ASICs非特异性抑制药阿米洛利和ASIC1特异性抑制药PcTx1对面部炎症疼痛行为的影响，研究ASIC1敲除鼠与野生鼠面部炎症疼痛行为学差异。结果：ASIC1、ASIC2a、ASIC3均在三叉神经节上有蛋白和mRNA表达，ASIC3的mRNA含量最高，ASIC1次之；ASIC1、ASIC2a、ASIC3均在支配面部感觉的三叉神经节神经元上表达，主要分布在胞浆和胞膜上；在急性分离的三叉神经元上记录到多种形态的酸敏感电流，使用PcTx1鉴定了其中的成分，ASICs电流表现出电压依赖性和pH值依赖性，ASICs通道的激活能够使三叉神经元细胞去极化；福尔马林炎症模型中ASICs的蛋白表达和电流密度都显著增加；阿米洛利和PcTx1能够显著降低福尔马林模型疼痛评分，ASIC1敲除鼠的疼痛评分明显小于野生型小鼠。结论：三叉神经元上表达功能性的ASIC1、ASIC2a和ASIC3，其中ASIC3的mRNA表达最多。面部炎症模型能够增加三叉神经节ASICs的表达和功能，给予ASICs抑制药和敲除ASIC1基因能够显著的降低福尔马林引起的疼痛行为，说明ASICs，特别是ASIC1参与面部炎性痛。第二部分酸敏感离子通道（ASICs）在单核巨噬细胞系RAW264.7中的表达及作用目的：RAW264.7细胞是一类小鼠源性的单核巨噬细胞系，巨噬细胞在免疫系统中发挥重要作用，能够启动炎症反应，吞噬细胞和消灭抗原。在炎症过程中，炎症信号能够诱导巨噬细胞迁移和聚集在炎症部位，而酸化是炎症的一个重要特征，本实验室前期实验结果表明酸化能够促进树突状细胞的成熟，因此本文在本部分实验中研究ASICs在RAW264.7细胞的表达情况及其在RAW264.7细胞病理生理过程中的作用。方法：采用western blot，RT-PCR和免疫荧光鉴定RAW264.7中ASIC各亚型的表达和分布；利用钙影像在RAW264.7细胞上记录胞外酸化引起的胞内钙升高；采用western blot检测ASICs抑制药对于RAW264.7细胞分泌炎性因子的作用；采用创伤模型研究ASICs在RAW264.7细胞迁移中的作用；采用细胞流式实验研究ASICs抑制药对于LPS诱导的RAW264.7细胞凋亡的影响。结果：Westernblot和RT-PCR的结果均证明RAW264.7细胞上存在ASIC1、ASIC2a和ASIC3，免疫荧光结果显示ASIC1主要在RAW264.7细胞核表达，ASIC2a和ASIC3在RAW264.7细胞胞浆和胞上大量表达；在LPS激活的RAW264.7细胞，钙影像记录到酸性外液引起的胞内钙升高；预先给予ASICs非特异性抑制药阿米洛利和ASIC1a特异性抑制药PcTx1能够显著降低RAW264.7释放促炎因子iNOS和COX-2；细胞流式实验表明阿米洛利和PcTx1能够明显降低LPS诱导的细胞凋亡；预先给予ASICs抑制药能够显著抑制RAW264.7细胞的迁移。结论：RAW264.7细胞上具有功能性ASICs的表达； ASICs抑制药能够抑制LPS引起的炎性因子增加和RAW264.7细胞的迁移；也可抑制LPS诱导的细胞凋亡。