论文部分内容阅读
目的：探讨IUGR幼鼠胰腺组织增殖和凋亡,肝脏mTOR/S6K通路及肝糖异生关键酶的变化与幼鼠IR发生的关系及营养干预的影响。方法：1.采用孕鼠妊娠期全程低蛋白饮食的方法建立IUGR幼鼠模型。通过控制每只母鼠喂哺幼鼠的个数,达到早期营养干预的目的。通过对3周龄和7周龄幼鼠进行腹腔葡萄糖耐量试验评价胰岛素敏感性。2.应用Real-time PCR方法测定IUGR幼鼠出生时,1周龄,3周龄和7周龄胰腺组织中增殖指标PDX-1和凋亡指标caspase-3,bax和bcl-2mRNA表达。3.应用Western Blot方法测定IUGR幼鼠出生时,3周龄和7周龄肝脏组织中mTOR/S6K,IRS-1以及p-IRS-1的蛋白表达。4.应用Real-time PCR方法测定IUGR幼鼠出生时,1周龄,3周龄和7周龄肝脏组织中PGC-1α和糖异生关键酶PEPCK和G-6-Pase mRNA表达。5.数据采用SPSS10.0软件进行统计学分析。结果：1.妊娠期全程低蛋白饮食母鼠(LPM)在妊娠第8天,第15天和分娩前体重均明显低于对照组(CM),P<0.01。并且LPM体重呈现先降低后升高的态势,而CM体重在整个妊娠期均呈增高趋势。2.宫内发育迟缓(IUGR)幼鼠出生时体重,鼻臀长和尾长都低于对照组(C),P<0.001。1周龄时,宫内发育迟缓未加强营养(IUGR-UN)幼鼠体重,鼻臀长和尾长均低于C,P<0.001。而宫内发育迟缓加强营养(IUGR-N)幼鼠体重已经达到对照组水平,P值为0.279;但是鼻臀长和尾长还落后于C,P值均为0.000。IUGR-N在体重,鼻臀长和尾长均高于IUGR-UN,P<0.01。3周龄时,IUGR-UN体重和鼻臀长明显低于C,P均值为0.000,但是尾长与C的差异没有统计学意义,P值为0.173。IUGR-N体重,鼻臀长和尾长不但超过了IUGR-UN,而且超过了C,P值均为0.000。7周龄时,IUGR-UN体重,鼻臀长和尾长都达到与C相同的水平,P>0.05;IUGR-N体重超过了C和IUGR-UN,P<0.05。但是鼻臀长和尾长在3组间是没有差异的,P>0.05。3.3周龄时,3组幼鼠的空腹血.糖(FPG)和腹腔糖耐量120分钟血糖(G120)水平没有差异,P>0.05。IUGR-N空腹胰岛素(PINS)120分钟胰岛素(I120)水平均明显高于C和IUGR-N,P<0.01。但是C和IUGR-UN胰岛素水平没有差异,P>0.05。7周龄时,IUGR-N FPG高于C,P值为0.022。IUGR-UN和IUGR-N G120均高于C组,P<0.05。但是这2组之间G120水平的差异没有统计学意义,P>0.05。IUGR-UN和IUGR-N PINS和I120均明显高于C,P<0.001。同时,IUGR-N FINS和I120水平亦明显高于IUGR-UN,P<0.001。4.3周龄时,IUGR-N HOMA-IR明显高于C组和IUGR-UN组,P值分别为0.000和0.000,IUGR-NU组和C组幼鼠的HOMA-IR差异没有统计学意义,P值为0.708。IUGR-N HOMA-IS明显低于C和IUGR-UN,P值分别为0.033和0.028,但C和IUGR-UN间差异没有统计学意义,P值为0.9111。IUGR-UN HOMA-β与C和IUGR-N的差异均存在统计学意义,P值分别为0.022和0.004。C组和IUGR-N组的差异没有统计学意义,P值为0.192。7周龄时,IUGR-UN和IUGR-N两组的HOMA-IR均明显高于C,P值均为0.000,这两组间的差异亦存在统计学意义,P值为0.006。IUGR-UN和IUGR-N两组幼鼠的HOMA-IS均明显低于C组,P值均为0.000,这两组间的差异也存在统计学意义,P值为0.016。IUGR-UN和IUGR-N两组HOMA-β均明显低于C组,P值均为0.000,这两组间的差异无统计学意义,P值为0.717。5.出生时,IUGR PDX-1mRNA表达低于C,P<0.05。1周龄时,3组幼鼠PDX-1mRNA表达差异无统计学意义,P>0.05。3周龄时,IUGR-N PDX-1mRNA表达高于C组和IUGR-UN,P<0.05。C和IUGR-UN间的差异没有统计学意义,P>0.05。7周龄时IUGR2组PDX-1mRNA表达明显高于C,P<0.05。IUGR-UN2组间的差异没有统计学意义,P<0.05。6.出生时,IUGR caspase-3mRNA表达高于C,P<0.05。1周龄时,3组幼鼠caspase-3mRNA表达的差异没有统计学意义,P>0.05。3周龄时,IUGR2组caspase-3mRNA表达均高于C,P<0.05。此2组间的差异没有统计学意义,P>0.05。7周龄时,IUGR2组caspase-3mRNA表达仍均高于C,P<0.05；IUGR-N caspase-3mRNA的表达明显高于IUGR-UN,P<0.05。7.出生时,IUGR bcl-2mRNA表达低于C,P<0.01。1周龄时,3组幼鼠bcl-2mRNA表达的差异没有统计学意义,P>0.05。3周龄时,IUGR2组bcl-2mRNA表达均低于C,P<0.05。此2组间的差异没有统计学意义。7周龄时IUGR2组bcl-2mRNA表达均低于C,P<0.05;此2组间的差异没有统计学意义。8.出生时,IUGR bax mRNA表达高于C,P<0.05。但是IUGR2组间bax mRNA表达的差异没有统计学意义。1周龄时,IUGR2组幼鼠bax mRNA表达均高于C组,P<0.05。IUGR-Nbax mRNA表达高于IUGR-UN,P值为0.000。3周龄时,IUGR2组bax mRNA表达均高于C,P值均为0.000。此2组间的差异没有统计学意义。7周龄时IUGR2组bax mRNA的表达均高于C组,P值分别为0.001和0.000；此2组间的差异没有统计学意义。9.出生时,IUGRmTOR, S6K, IRS-1和p-IRS-1ser636蛋白表达低于C,,P值分别为0.000,0.003,0.023和0.007。3周龄时,IUGR-UN和IUGR-N2组幼鼠mTOR和p-IRS-lser636的蛋白表达超过C组,P为0.000和0.000及0.019和0.012,虽然mTOR蛋白表达在IUGR2组间没有差异,P值为0.120；但是,p-IRS-1ser636蛋白表达在2组间有差异,P值为0.032。同时,S6K和IRS-1蛋白表达水平在3组间没有差异。7周龄时,IUGR mTOR,S6K和p-IRS-1ser636蛋白表达均超过C,P<0.05。但是IRS-1的蛋白表达在3组间没有差异。10.出生时,IUGR PGC-1α mRNA, G-6-Pase mRNA和PEPCK mRNA基因表达均高于C,P<0.05。1周龄时,3周龄时和7周龄时,IUGR PGC-la mRNA, G-6-Pase mRNA和PEPCK mRNA基因表达均高于C组,P<0.01。同时,IUGR-N PGC-la mRNA, G-6-Pase mRNA和PEPCK mRNA基因表达均高于IUGR-UN, P<0.01。结论：1.应用孕鼠妊娠期全程低蛋白饮食的方法,可以成功建立IUGR幼鼠的模型。2.对于IUGR幼鼠,哺乳期营养的加强只是加快了追赶生长的速度,加速了肥胖的出现,对于性成熟期前的最终身高没有影响。而且哺乳期营养的加强会造成性成熟期前IR的出现和血糖的异常。而正常喂养方式可以延缓IR和血糖异常的发生,但在性成熟期前,仍会造成糖代谢的异常。这或许是IUGR婴儿成年后2型糖尿病发病率增高的一个原因。因此对于具有IUGR病史的婴儿,应该尽早监测糖代谢的情况；阻止哺乳期婴儿快速体重增加或许可以预防儿童时期体重的增加。3.孕母妊娠期营养不良会使IUGR幼鼠出生时胰腺组织凋亡增加,增殖降低。营养干预影响IUGR幼鼠胰腺的凋亡和增殖。在生命早期,bax首先触发凋亡过程,哺乳期给予适当的营养干预,抑制凋亡基因的表达,增加胰腺增殖,是改善IUGR儿童今后糖代谢的关键。4.宫内不良的营养环境造成肝脏糖异生关键酶的表达增加,而这种增加持续至出生后,支持节俭表型假说,同时是IUGR幼鼠成年时期发生2型糖尿病的基础。5.营养是一柄双刃剑,通过激活mTOR/S6K途径,一方面促进机体的生长发育,另一方面造成IR,合理平衡营养,或许是改善IUGR婴儿成年预后的关键。对于mTOR/S6K途径的干预或许可以成为治疗IR的新靶点。