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促孕灌注液(Fertility-promoting Intrauterine Infusion Liquid, FPL)是防治母畜卵巢静止和持久黄体不孕症的纯中药成方制剂,由益母草、淫羊藿和红花经水提醇沉制得,其主要功能为补肾壮阳、活血化瘀、催情促孕,深受兽医临床关注。但由于促孕灌注液灌入母畜子宫后易发生药液泄漏,影响治疗效果,且给药频率较高,增加了对母畜的刺激性,易造成母畜子宫机械损伤。原位凝胶具有物理稳定性高、缓释、靶向性好等优点,是一种极有发展前景的新型给药系统,已在临床广泛用于皮肤、眼部、鼻腔、口腔、阴道、直肠等不同给药途径以控制药物释放。泊洛沙姆是制备温度敏感型原位凝胶的常用基质材料,由于其温敏性好,泊洛沙姆凝胶已广泛用于药物载体的研究。本实验以FPL为模型中药,对其原位凝胶的制备、体外释放、体外溶蚀、体内药效学特性进行考察,以期成功制备得到用于子宫灌注给药的促孕原位凝胶灌注液(Fertility-promoting Intrauterine Infusion in situ Gel, FPG),改善FPL临床应用时发生泄漏和给药频率高等不足,增加药物的生物利用率和疗效。分别建立了淫羊藿苷和总黄酮的体外分析方法。淫羊藿苷浓度与峰面积的回归方程为：S=43690.18C+16581.14(R2=0.9997),总黄酮浓度与吸光度的回归方程为：A=0.0246C+0.0174(R2=0.9993)。为考察FPL制备过程中的各因素对提取效率的影响,分别以淫羊藿苷和总黄酮为指标,在单因素试验的基础上,采用响应面的中心组合设计法优化提取工艺参数。实验结果表明,液料比、煎煮时间、提取次数3个因素对促孕灌注液中淫羊藿苷和总黄酮的提取率均有较明显地影响,而浸泡时间对提取率的影响较小。经响应面法优化后得到的最优提取工艺为：提取时间10 min,液料比为17.5 mL/g,提取时间为38 min,提取次数为3次。分别得到促孕灌注液中淫羊藿苷提取率和总黄酮的提取率对液料比(A)、煎煮时间(B)、提取次数(C)的二次多项回归模型为：淫羊藿苷提取率(mg/g)=2.23+0.097 A+0.037 B+0.021 C+4.445×10-3 AB+0.14 AC+0.14 BC-0.17 A2-0.10 B2-0.37 C2。总黄酮提取率(mg/g)=14.11+0.16 A+0.27 B+0.60 C+0.21 AB+0.056 AC+0.099 BC-0.55 A2-0.36 B2-0.66 C2。分别考察泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、羟丙甲基纤维素、海藻酸钠等对胶凝温度的影响。结果显示,泊洛沙姆407和泊洛沙姆188的含量对胶凝温度有明显地影响,而羟丙甲基纤维素和海藻酸钠对胶凝温度的影响不明显。向空白凝胶中加入FPL会使原位凝胶的胶凝温度明显地降低。结果显示,配比为18%P407+5.0%P188+0.3%SA+FPL,18%P407+7.5%P188+0.3%HPMC+FPL和19%P407+2.5%P188+0.3%HPMC+FPL的凝胶的胶凝温度分别为29.3±0.3,27.9±0.2和27.3±0.4℃,较合适。取以上三种配方的原位凝胶进行体外溶蚀和体外释放试验。结果显示,3种原位凝胶在5h时,FPG溶蚀率和药物释放率均达到约90%。分别以3种凝胶的累积释药率(功对累积溶蚀率(X)作图,得回归方程分别为η=0.9282X-0.0012(R2=0.9915),η=0.9806X-0.0331(R2=0.9936),η=1.0021X-0.0183(R2=0.9978),线性关系良好,且拟合方程的斜率接近1,表明凝胶溶蚀是控制药物释放的主要因素。将制备得到的FPG注入到大鼠皮下,溶胶迅速在皮下转变成半固体凝胶,说明本实验制备的原位凝胶在体内有较好的胶凝的特性,符合试验预期和临床用药要求。考察FPL与FPG对子宫指数和卵巢指数的影响,并将大鼠的子宫进行组织切片研究,观察FPL和FPG对子宫内膜的影响。结果显示,FPL和FPG均能增加大鼠的子宫指数和卵巢指数,但是,FPG的效果更加的明显。FPL和FPG对子宫内膜均没有明显组织损伤。以大鼠血清中雌二醇的含量为指标,考察FPL和FPG对大鼠血清中雌二醇含量的影响。结果表明,持续给药7天后,血清中的雌二醇含量明显增加,且FPG组大鼠的雌二醇含量明显高于FPL,随着给药时间的进一步增加,FPG组大鼠的雌二醇含量逐渐降低,最后于FPL持平,但是均明显高于给药前大鼠血清中的雌二醇浓度。实验表明,将FPL制备成FPG后,可以使药物缓慢释放,有更好的药效。将制备的FPG用安瓿灌封之后进行低温试验、高温试验和强光照射试验。结果显示,FPG在低温、高温和强光照条件下均较稳定。实验成功制备FPG,此法简便可靠,质量可控。药物质量评价、体外释放实验和药效学实验表明,FPG相较于FPL具有释放缓慢的特点,可减少用药次数,具有很好的发展前景和临床运用价值。