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目的:探究BFA与顺铂体外抗人肺癌和人卵巢癌的协同作用及分子机制。 方法:将人肺癌细胞(GLC-82)和人卵巢癌细胞(SK-OV-3)分别分为对照组、BFA组、CDDP组、BFA+CDDP组。对各组进行以下实验:(1)MTT法测定BFA和CDDP单独及联合处理对人肺癌细胞株GLC-82和人卵巢癌细胞株SK-OV-3生长抑制率;(2)药物联合作用指数(CI)、药物剂量降低指数(DRI)和等效图解法分析两药物之间药效学的相互作用;(3)倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;(4) DAPI染色,荧光显微镜观察细胞核变化;(5)Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞术检测细胞凋亡;(6)JC-1染色,流式细胞术检测线粒体膜电位变化;(7)实时荧光定量 PCR(q-RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测线粒体凋亡通路、内质网应激标志分子GRP78、GRP94、CHOP及PERK-ATF4通路、IRE1α-XBP1通路、ATF6通路相关基因及Caspase3的表达。 结果:(1)MTT结果表明,BFA和CDDP处理GLC-82细胞和SK-OV-3细胞24 h时,对细胞的生长均具有显著的抑制作用,且呈剂量性依赖,GLC-82细胞的IC50分别为100 ng/ml和4μg/ml,SK-OV-3细胞的IC50分别为450 ng/ml和9μg/ml;且BFA和CDDP联合处理各浓度组合CI值绝大多数小于1,DRI值均大于1,其剂量比例点绝大多数位于等效线下方。 (2)细胞形态学观察:药物处理24 h后,BFA处理组细胞皱缩、变圆,CDDP处理组细胞形态无明显变化但有少量凋亡细胞,BFA+CDDP处理组较单独用药组细胞皱缩、变圆加剧且凋亡细胞增多;药物处理48 h后较24 h细胞形态的异常变化进一步加剧。 (3)DAPI染色观察:药物处理24 h后,对照组细胞核完整染色均匀,BFA处理组和CDDP处理组细胞核固缩且呈致密浓染,BFA+CDDP处理组与单独用药组无明显差异;药物处理48 h后,较24 h细胞形态变化进一步加剧,但BFA+CDDP处理组呈致密浓染细胞核数量及核裂解碎片显著增多。 (4)流式细胞术检测凋亡: BFA+CDDP处理 GLC-82细胞凋亡率为(14.1±2.3)%,显著高于BFA处理组(P<0.01)、CDDP处理组(P<0.01)及对照组(P<0.01);BFA+CDDP处理 SK-OV-3细胞凋亡率为(17.0±1.3)%,显著高于BFA处理组(P<0.01)、CDDP处理组(P<0.01)及对照组(P<0.01)。 (5)流式细胞术检测线粒体膜电位: BFA+CDDP处理GLC-82细胞线粒体膜电位下降率为(28.3±0.7)%,显著高于BFA处理组(P<0.01)、CDDP处理组(P<0.01)及对照组(P<0.01);BFA+CDDP处理SK-OV-3细胞线粒体膜电位下降率为(13.9±1.7)%,显著高于BFA处理组(P<0.01)、CDDP处理组(P<0.01)及对照组(P<0.01)。 (6)线粒体凋亡通路相关基因的表达:药物处理24 h后,与对照组和单独处理组相比,BFA+CDDP处理组BCL2、 Bax和Cyt C的表达均增加;而48 h后,BCL2表达显著降低,而Bax和Cyt C的表达仍维持较高的水平。 (7)内质网应激凋亡通路相关基因的表达:药物处理24 h后,与对照组和单独处理组相比,BFA+ CDDP处理 GLC-82细胞和SK-OV-3细胞 ERS伴侣蛋白GRP78、GRP94以及各通路的相关蛋白PERK、ATF4、IRE1α、XBP1、ATF6、CHOP的表达均上调;而48 h后,GRP78、GRP94、PERK、ATF4、IRE1α、XBP1、ATF6均呈不同程度的下调,但转录因子CHOP的表达仍维持较高的水平。 (8)Caspase3的表达:药物处理24 h后,与对照组和单独处理组相比,BFA+CDDP处理组Caspase3的表达上调,且其剪切激活增加;药物处理48 h后,Caspase3剪切激活进一步增加。 结论:BFA具有协同增强顺铂抗肺癌和卵巢癌活性,其主要机制可能是激活了线粒体凋亡通路和内质网应激通路,最后通过Caspase3启动细胞凋亡。