论文部分内容阅读
目的：
FGFR3是骨骼发育过程中重要的调控分子，主要通过抑制软骨细胞增生、分化来抑制软骨形成过程，其功能增强型点突变可以导致软骨发育不全(Achondroplasia，ACH)。同时发现FGFR3能够影响骨形成过程，但具体作用和分子机制还不清楚。本研究旨在明确FGFR3是否通过降低软骨细胞分泌BMP4间接影响骨形成过程。
方法
1．细胞试验：
(1)原代培养ACH、野生型小鼠软骨细胞和成骨细胞，利用Transwell建立不同基因型软骨细胞与成骨细胞的共培养模型；
(2)利用实时定量PCR技术分别检测成骨细胞与不同软骨细胞共培养后以及单独培养的成骨细胞中cbfa-1、OP、OC等标记基因的表达差异，同时检测ACH和野生型软骨细胞BMP4的表达差异；
(3)鉴于BMP2于BMP4有极高同源性，且相互之间功能可以代偿，故通过在与ACH软骨细胞共培养组加入外源性rh-BMP2，定量检测成骨细胞cbfa-1、OP、OC等成骨标记基因的表达，并与野生型软骨细胞共培养组及单独培养的成骨细胞进行比对研究。
2．胚胎胫骨培养试验：
(1)建立小鼠16.5天胚胎胫骨体外培养模型；
(2)在培养的ACH胚胎一侧胫骨加入外源性rh-BMP2后，与对侧胫骨比较，从大体测量、藏红-固绿染色及定量检测cbfa-1、OP、OC等基因表达评估其骨形成功能，并与培养的对侧胫骨及野生型胫骨进行比对研究。
结果
1．细胞试验：
共培养组的成骨细胞标记基因表达均较成骨细胞单独培养组高，且与ACH软骨细胞共培养组的成骨细胞cbfa-1、OP、OC等标记基因的表达较与野生型软骨细胞共培养组明显降低，表明成骨功能受到抑制。与之相对应的是ACH软骨细胞中BMP4的表达与野生型软骨细胞相比也明显降低。在加入外源性的rh-BMP2后，ACH共培养组的成骨细胞cbfa-1、OP、OC等基因的表达水平显著升高，成骨功能得到恢复。
2．胚胎胫骨培养试验：
培养的ACH胚胎胫骨在加入外源性rh-BMP2后的总长度、钙化区长度都较未加rh-BMP2组有所增加。从组织学切片上也表现为钙化区面积增加。并且其cbfa-1、OP、OC等基因的表达较对照组均有明显上调，表明其成骨功能增强。
结论
FGFR3可通过下调软骨细胞BMP4的表达来间接抑制骨形成过程。