论文部分内容阅读
黄连素是从黄连、黄柏、三棵针等数十种中药中提取的一种季胺类化合物，属于异喹啉生物碱，具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗心律失常、抗心力衰竭、保护缺血心肌、抑制血管平滑肌增殖、降血压、降血脂、降血糖、抗血小板聚集等药理活性。近年来，对其抗氧化活性及抗癌活性的研究备受人们关注。本文以黄连素为材料，测定了它在体外的抗氧化及抗癌活性。采用MDA测定、琼脂糖凝胶电泳、彗星电泳技术和SDS-PAGE法，检测了对脂质过氧化、DNA氧化断裂和蛋白质氧化损伤的保护作用；用黄嘌呤氧化酶-NBT还原法、甲基紫法、DMPD·+法及Oyaiuz法测定清除超氧阴离子、羟自由基及DMPD·+自由基的能力和还原力的大小。还检测了黄连素对肝癌细胞株HepG2和白血病细胞株K562的毒性、对细胞增殖的抑制作用、对K562细胞DNA的损伤作用和诱导K562细胞凋亡作用。结果如下：（1）黄连素对生物大分子的氧化损伤有较好的保护作用。在抑制脂质过氧化时，浓度为5μmol·L-1时，抑制率为1.6 %；320μmol·L-1时，抑制率达到95.5 %。在保护DNA的氧化断裂时，在10 mmol·L-1 AAPH引发的质粒pBR322DNA氧化的体系中，低浓度下(5μmol·L-1)其对DNA氧化断裂有微弱的保护作用；80μmol·L-1时基本完全保护DNA的氧化断裂。在50μmol·L-1 H2O2诱导的人外周血单个核细胞DNA氧化损伤的模型中，6.25μmol·L-1黄连素使细胞DNA损伤显著减少，损伤率从81.7 %降至66.2 %；当浓度达到100μmol·L-1时，损伤率降为48.4 %。黄连素对蛋白质氧化损伤的保护作用与Trolox接近，320μmol·L-1时，均可完全保护蛋白质不被氧化降解。（2）黄连素在体外有较强的清除自由基的能力和还原力。它对超氧阴离子的清除效果优于Trolox，浓度为160μmol·L-1时，其清除率已达到99.2 %。对羟自由基也具有很好的清除作用，与Trolox的清除效果基本相当，当浓度为160μmol·L-1时，清除率分别达到91.0 %和96.0 %。在FeCl3引发的氧化体系中，黄连素清除DMPD·+的作用较弱，浓度达到1 280μmol·L-1时，清除率只达到35.0 %。此外，Oyaiuz法表明黄连素还具有较好的还原力。（3）在对肝癌细胞株HepG2和白血病细胞株K562的抑制作用中，黄连素可明显抑制两种癌细胞的增殖，且具有浓度和时间依赖性；黄连素处理24、48 h后，对HepG2细胞的IC50分别为19μmol·L-1和9μmol·L-1；对K562细胞的IC50分别为11μmol·L-1和3μmol·L-1，表明对两种细胞都具较高毒性，而且K562细胞对黄连素更敏感；在较高浓度(80、160μmol·L-1)处理48 h可引起两种癌细胞死亡。（4）在用彗星电泳技术检测黄连素对K562细胞DNA的损伤作用中，处理细胞48 h后，2.5μmol·L-1时，损伤率为23.4 %（基础损伤率为10.0 %）；当浓度为160μmol·L-1时，损伤率已达到92.8 %。说明高浓度黄连素可引起严重的K562细胞DNA的损伤。（5）在AO/EB双染法检测黄连素诱导K562细胞凋亡的实验中，作用呈浓度和时间依赖关系。处理细胞24 h后，40μmol·L-1和160μmol·L-1黄连素处理组细胞凋亡率分别为16.9 %和29 %（对照细胞凋亡率为10.1 %）；处理48 h后，160μmol·L-1时凋亡率达到75.2 %（对照细胞凋亡率为5.2 %）。综上，黄连素在体外多个体系中有较好的抗氧化活性；对肝癌细胞株HepG2和白血病细胞株K562有很强的生长抑制作用；此外，黄连素在较高浓度可诱导K562细胞凋亡，其诱导凋亡的作用可能和引起细胞DNA损伤有关。