二维液相色谱—质谱联用技术在复方银黄制剂成分研究中的应用

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银黄制剂是由金银花、黄芩提取物加工而成的一种中药制剂,具有清热解毒、消炎的效果。而原料药材金银花和黄芩都是常用的中药,其中都含有许多活性成分,这些活性成分具有抗氧化、清除自由基、抗炎等作用,临床上主要用于多种感染、各种炎症、高热症、肿瘤放疗、丹毒等40余种疾病的治疗。因此,本文对银黄制剂中的有效成分进行了研究,从而有利于对其进行全面地质量控制。本文分别对金银花和黄芩中有效成分的提取方法进行了筛选,优化了各自的提取条件;优化了金银花和黄芩混合提取液的高效液相色谱分离条件;将离线二维液相色谱技术用于分离混合提取液中的化学组分;采用液质联用技术对混合提取液中的有效成分进行了初步鉴定。本论文共分六章,主要内容包括:第一章:文献综述,主要介绍了选题背景和意义。主要包括金银花和黄芩的化学成分和药理药效;银黄制剂的研究现状;多维液相色谱技术的原理和研究进展以及二维液相色谱技术在分离复杂样品特别是中草药中组分分离的应用。第二章筛选了金银花中有效成分的提取方法,优化了提取条件。通过筛选最终确定的提取方法是微波提取法,优化的提取条件为:70%甲醇作为提取溶剂,液料比为40,加热时间1 min,提取次数为4次,微波功率为400 W。第三章筛选了黄芩中有效成分的提取方法,优化了提取条件。通过筛选最终确定的提取方法是微波提取法,优化的提取条件为:70%甲醇作为提取溶剂,液料比为80,加热时间1 min,提取次数为3次,微波功率为640 W。第四章优化了金银花和黄芩混合提取液的液相色谱分离条件,并以其中含量较高的11个色谱峰作为代表,进行了方法学考察。通过对检测波长、流动相、梯度条件、流速四个方面的考察,最终确定的色谱条件为:色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm, Unimicro Technologies. Inc., USA);流动相:A液为甲醇,B液为0.1%磷酸水溶液;梯度洗脱:0-10 min,20%A-35%A;10-24 min,35%A-55%A;24-35 min,55%A-70%A;35-40 min,70%A-70%A;40.01-45 min,20%A-20%A;检测波长:254 nm;流速:1.0 mL·min-1;进样量:10μL。金银花和黄芩混合提取液在此条件下能够得到较好的分离,通过方法学考察表明该方法精密度高、重复性好。第五章研究了二维液相色谱对金银花和黄芩混合提取液中组分的分离。以氰基柱作为第一维色谱柱,以C18柱作为第二维色谱柱,对金银花和黄芩混合提取液进行二维分离。与一维分离相比,峰容量和分离效率大大提高。第六章利用液质联用技术对金银花和黄芩混合提取液中的有效成分进行了初步分析。本文通过应用液质联用技术和二维色谱分离技术进行了金银花和黄芩混合提取液进行了研究,为中药分离分析提供了新思路和新方法。
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